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Diagóstico Inmunológico del Linfoma en A.P

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Transcript of Diagóstico Inmunológico del Linfoma en A.P

SISTEMA LINFOIDE
INTRODUCCIÓN
LA INMUNOHISTOQUÍMICA (IHQ)
Se desarrollan a partir del 1942. Albert Conns, describe el método inmunofluorescencia para antigenos celulares.
25 años después Nakane, Pierce y Avrames, revolucionaron la técnica llegando a la IHQ hasta el día de hoy.
DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO
DEL LINFOMA EN ANATOMÍA PATOLÓGICA

OBJETIVO DEL TRAJABO
Hablar de los métodos de inmunohistoquimica, explicar en que consisten, concretamente y centrarme en el linfoma de Hodgkin. Haciendo un seguimiento de un caso
en concreto.
DEFINICIÓN:
+
HISTORIA:
Es un proceso que consiste en la localización de antígenos en tejidos o células basados en la reacción antígeno-Anticuerpo, marcado por una enzima

APLICACIÓN:
Tejidos de:
-Biopsia-Autopsia
-Frescos -Congelados
-Fijados en formol
-Muestras citologicas
UTILIDAD:
Diagnóstico, pronóstico y clasificación de los tumores
Marcadores para identificar los diferentes tipos de cáncer.
Determinación del origen del tumor.
Identificación de agentes infecciosos
Desarrollo de fármacos
Investigación biológica en la ubicación de las proteínas.
FUNDAMENTOS:
El paso fundamental consiste en la exposición del antígeno, para ser identificado frente al un anticuerpo idóneo. Para constituir un enlace Antígeno-Anticuerpo (Ag-Ac)
Podremos conocer la ubicación real de una determinada sustancia de un tejido, gracias a "marcadores"

PRODUCCIÓN DE LOS ANTICUERPOS:
Utilizaremos animales a los que les inyectan el antígeno problema. A partir de una extracción sanguínea se obtiene el suero del que se purifican los anticuerpos.
ANTICUERPOS POLICLONALES
Mezcla de anticuerpos contra diferentes antígenos de una misma proteína. Utilizando anticuerpos secundarios.
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Mezcla de anticerupos contra un único antígeno de una proteína. Obteniendo más ventajas como por ejemplo: siendo más puros, homogéneos, más afinidad y producción de forma infinita.
MÉTODO DIRECTO E INDIRECTO
MÉTODO DIRECTO
Un marcador permite tanto la detección "directa" como "indirecta" del antígeno
El marcador se une a través de un enlace covalen al anticuerpo primario que reacciona directamente con el antígeno en secciones de tejido.
MÉTODO INDIRECTO
El marcador se une covalentemente a un anticuerpo secundario, que se une al anticuerpo primario durante el inmunoensayo.
Circulación que corresponde al sistema linfático. se trata de un sistema de transporte
que inicia en los tejidos corporales, continuando por vasos linfáticos y desembocando en la sangre.
El sistema limfatico es una parte concreta del sistema inmunitario diseminado por todo el organismo compuesto por los siguientes elementos primarios y secundarios:
-Linfa
-Vasos limfáticos
-Ganglios linfáticos
-Bazo -Timo -Amígdalas -Médula ósea

CASO PROBLEMA
HOSPITAL UNIVERSITARI SANT JOAN DE REUS

Paciente varón de 38 años de edad, a quien desde hacía 8 meses presentaba:
-Fiebre intermitente
-pérdida de peso
-Anemia severa
Se pueden observar adenopatías múltiples generalizadas en zona cervical derecha de más de 3,5 CM.
Sala de inclusión
La muestra pasa a la sala de inlusión en donde el técnico realizará el corte y la disección. registraremos etiquetaremos los cassettes.
Se realiza una P.A.A.F
RESULTADO:
Muestra células muy similares a las de Reed-Sternberg, células monocloales, neutrófilos y linfocitos. Inmediatamente se empieza a sospechar sobre un
LINFOMA DE HODGKIN.
Clínicamente:
El LH se trata de una proliferación tumoral maligna primaria de los ganglios linfáticos, provocando el aumento de una región del organismo
CÉLULA DE REED-STERNBERG
Desconocida se piensa que frecuentemente esta relacionada con una infección pasada por el virus de Epstein-Barr.
CITOLOGICAMENTE:
Células de Reed-Sternberg y sus variantes.
ETIOLOGÍA:
10-200 micras.
Binucleada
Disposición en "espejo"
Cromatina: Tosca e irregular con tendensia a marginarse
Nucléolo: Grande
Citoplasma: Amplio, pálido
10-100 micras
Un único núcleo
Cromatina:tosca e irregular
Nucléolo: Grande
Citoplasma: Amplio, pálido
CÉLULA DE HODGKIN:
SEGUIMIENTO DEL GANGLIO LINFÁTICO EN EL LABORATORIO DE ANATOMÍA PATOLOGICA
Llega la muestra en formol a secretaria del laboratorio.
El abministrativo comprueba la equiqueta y la hoja de petición
Histolab
pondremos las muestras en el procesador en donde estarán 15-17 horas
con el fin de endurecer la muestra en sustancias líquidas No hidrosolubles que después
de un proceso de enfriamiento o polimerización se solidifican sin afectar las características

-Formol 2h
-Alcohol/formol 2h
-Alcohol 70% 1h
-Alcohol 96 % 1 h -Alcohol 96 % 1 h
-Alcohol 100% 1h.
-Alcohol 100% 1h -Alcohol 100% 1h
-Alcohol 100% 1h
- Xilol 1h
-Xilol 1h
-Parafina 1 hora 50 min -Parafina 2h

PROTOCOLO:
AUTO-TEC
detectará cada cassette y automáticamente diferenciara entre la biopsia, la orientación estándar. Cada casete se coloca a continuación en el molde base del tamaño adecuado, la parafina se dispensa con precisión y luego del enfriamiento se activa para formar un bloque.
PASOS A SEGUIR:
BLOQUES MANUALMENTE
1. Cogeremos el cassette de la cesta, tener preparado un molde de metal y llenar de parafina.
2.pondremos dentro la muestra de tejido
3.colocaremos encima de la muestra la parte del cassette que habíamos identificado.
4. Acabaremos de llenar el molde de parafina
5.lo pondremos encima la placa fría
CORTE
-desbastaremos el bloque pondremos encima la placa fría
-Cortaremos obteniendo tiras de sección unidas por las caras paralelas a la cuchilla.
- Colocáremos las tiras en un baño de flotación con el objetivo de “pescarlo” en el porta.


TINCIÓN:
Una vez tenemos como máximo 3 cubetas de portaobjetos pasaremos a la sala de

máquinas en donde tendremos la teñidora
automática que nos proporciona la facilidad

de usar combinando tinción de rutina,

técnicas especiales de tinción y cubreobjetos

Una vez cortado todo los bloques se guardan en el archivador tanto del ordenador por el sistema QR, como en el laboratorio
ARCHIVO
LA HE
retomando nuestro paciente del ganglio linfático, obtenemos imágenes en la histología. Dándonos nuevamente la apariencia mucho más clara de una población linfoide atípica en disposición aislada con un fondo de infiltrado linfocítico No neoplásico.
presencia de células de Reed-Sternberg y sus variantes
ANTÍGENOS PARA EL LH
CD 3
Reconociendo una proteína asociada al receptor de células T en células T maduras
CD 3O

CD 30: Reconoce una proteína de activación, miembro de la familia del factor de necrosis
tumoral. Marca la célula de RS en el 90% EH clásica, con su patrón característico
de membrana y paranuclear.

CD 15
Reacciona con Ag presentes en neutrófilos maduros, monocitos y subgrupos de
células T. Es reconocido como marcador de células de Reed-Sternberg en Enfermedad de Hodgkin.

CD 20
Antígeno B de membrana Se pierde en la etapa de diferenciación terminal de células B a células plasmáticas. Las células se pueden expresar de una forma más débil con la Enfermedad de Hodgkin predominio linfocitario nodular y solo en un subgrupo de células de Reed- Sternberg (RS)
ki67
Marcador de proliferación tumoral reconoce un Ag nuclear expresado en todos los
estados del ciclo celular excepto G0(justo antes de la mitosis) .
BEV
afecta con frecuencia a la mayoría de los humanos. Cuando la infección se produce en la infancia, ésta es,habitualmente, asintomática; en los adolescentes, por el contrario, el virus representa la causa más importante de mononucleosis infecciosa
Utilizando como valor pronóstico no, como diagnóstico.
controles
Al volver a realizar el corte tenemos que poner junto con la muestra unos controles o testigos que nos verifiquen que la técnica está correctamente realizada, y se marca en un (control positivo) y otro (negativo).
Una vez tenemos las laminillas con la muestra y el control adecuado las pondremos en la estufa por 1 hora a 60º.
ESTUFA
PH:

Seguidamente las pondremos en una cubetas especiales para separarlas por PH 6 y 9 en este caso:

CD3: PH 9
CD 15: PH 9
CD 20: PH 9
VEB: PH 9
CD 30: PH 6
KI67: PH 6

En estas estufas con el PH indicado para cada antígeno estarán 1 hora y media de pH a 94º durante 20 min
Inmediatamente cuando pasa el tiempo pondremos las laminillas en el Buffer(solución de lavado) durante 5 minutos.
Finalmente pondremos todas las laminillas en la "DAKO" o "LA JEFA"
Humedecemos con Buffer las muestras con el fin de mantener la humedad.
Pondremos los reactivos o antígenos correspondientes y desde el software del ordenador le daremos “iniciar”.
INMUNOTEÑIDOR "DAKO"
El funcionamiento consiste en:
- Una vez le damos iniciar desde el ordenador
- Un brazo de lectura automatizada de QR lee todas la laminillas
- Seguidamente de los reactivos y comprueba que no falte ni sobre ninguno
- Y comienza el proceso que durará aproximadamente 2 horas y media


Cuando finaliza extraemos nuevamente las laminillas las pondremos en una cubeta y las llevaremos al auto teñidor esta vez con la opción de “deshidratar” y “ montar”

Validamos las laminillas y las entregamos al patólogo en una bandeja con el fin de obtener un diagnóstico más concreto.
RESULTADOS DE LA IHQ
Los linfocitos atípicos expresan positiva para anticuerpos CD15
Los linfocitos atípicos expresan positiva para anticuerpos CD30

Los linfocitos atipicos expresan negativa para anticuerpos CD3


Los linfocitos atipicos expresan negativa para anticuerpos CD20

En este caso no se demuestra infección latente del virus en las células neoplásicas.

el 60% de las células atípicas lo expresan, determinando que células van a entrar en mitosis.
TRATAMIENTO:

varía en función de la extensión de la enfermedad pero en este caso en

concreto se basa en la quimioterapia que consiste en la inoculación de varios fármacos activos frente a la enfermedad, administrados cada 4 semanas

con un número variable de ciclos en función de la extensión de la enfermedad. se compone de dos partes que se

administran los días 1 y 15 de cada mes.

CONCLUSIÓN:
Todas las técnicas de inmunohistoquímica constituyen una parte incondicional en Anatomía

patológica, porque aunque en la P.A.A.F. ya sospechamos o tenemos casi seguro el

diagnóstico es fundamental y hace parte de un protocolo realizar tales técnicas.

Pero todo ello se consigue gracias a un buen equipo de trabajo desde el principio de una

primera visita de un paciente hasta su diagnóstico final incluyendo su tratamiento.

Y el técnico en Anatomía patológica hace parte de este gran ciclo obteniendo una gran

responsabilidad porque aunque en el hospital no diagnosticamos como tal, si facilitamos el

diagnóstico y el trabajo del patólogo



AGRADECIMIENTOS:
Quiero darle las gracias a todo el servicio de Anatomía patológica, a los técnicos por

la paciencia por prestarme su apoyo y ayuda para poder realizar este trabajo

A la DRA. Vanessa Morente por regalarme un poco de su tiempo para obtener mucha

más facilidad en ciertos temas de el trabajo como la facilidad de obtener libros e

información.


MUCHAS GRACIAS.

SEGUIMIENTO Y PROCESO DE LA MUESTRA
cápsula del ganglio engrosada con mucha fibrosis y conceptos que entran para el interior
BIBLIOGRAFÍA:
Libros:

Anatomía patológica F.J. Pardo Mindán ISBN-13: 978-848174173
Técnico superior en Anatomía patológica ISBN: 9788466571517

Atlas de Anatomía Patológica S.A. ELSEVIER ESPAÑA ISBN: 9788480862752

Páginas web:

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/18704/1/HISTOLOGIA_P2.pdf
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0210-48062004000200006

http://es.slideshare.net/MaferAbril/linfoma-de-hodgkin?qid=c32f06fc-dcd0-49d1-9b96-0590f56055fd&v=default&b=&from_search=39


http://es.slideshare.net/angelofmedicine/linfoma-de-hodgkin-y-linfoma-no-hodgkin


http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000580.htm

http://www.conganat.org/icongreso/conferencias/007/enfermed.htm

http://www.shu.com.uy/images_hematologia/socios/material_cientifico/ihqenlinfomasparasociedaddehematologia.pdf


http://www.fcarreras.org/es/linfoma-de-hodgkin_378694

http://www.conganat.org/linfo.tortosa/6curso/ihq/
https://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=e02a3cb5-4190-4bea-86e2-cbea47c1257e&groupId=10157


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