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Sondas Radiactivas

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by

abdiel oller

on 28 April 2014

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Transcript of Sondas Radiactivas

Una sonda es un fragmento de ADN de pequeño tamaño usado en biología molecular como herramienta para detectar la presencia de ADN o ARN de secuencia complementaria parecida o igual.
una sonda de ADN es un método molecular que consta de una secuencia de ADN de un microorganismo de interés, que puede ser utilizada para detectar un ADN homólogo o secuencias de ARN. El ADN de la sonda se hibrida con el ADN del organismo que se quiere detectar, unión que como puedes suponer, se establece porque ambas moléculas tienen secuencias complementarias, formándose así pares de bases complementarias. Para conocer si esto ha sucedido se utilizan marcadores fáciles de detectar en un equipo que mida el cambio. Estos marcadores pueden ser de varios tipos.


Sondas de ADN
Sondas Radiactivas
Radioisótopos: para marcar radiactivamente la sonda se utilizan nucleótidos que contienen alguno de sus átomos un isótopo radiactivo. Estos marcadores son muy sensibles, pero entrañan ciertos riesgos para la salud.
Anticuerpos: en este caso las sondas se marcan utilizando nucleótidos que llevan unida una molécula llamada digoxigenina. A esta molécula se unen anticuerpos específicos que llevan asociados un compuesto luminiscente que permite conocer el resultado del análisis.
Los más utilizados son los siguientes:
Southern blot
, hibridación Southern o, simplemente, Southern es un método de biología molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este ácido nucleico. Para ello, emplea la técnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su longitud y, después, una transferencia a una membrana en la cual se efectúa la hibridación de la sonda. Su nombre procede del apellido de su inventor, un biólogo inglés llamado Edwin Southern.
Una de las aplicaciones de las sondas de ADN
GRACIAS
Es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para un péptido dado en una extracción de ARN total). Para ello, se toma la mezcla de ARN y se somete a una electroforesis en gel a fin de separar los fragmentos en base a su tamaño. Tras esto, se transfiere el contenido del gel, ya resuelto, a una membrana cargada positivamente en la cual se efectúa la hibridación de una sonda molecular marcada radiactiva o químicamente. El nombre de la técnica deriva de la técnica anterior. El northern blot fue desarrollado en 1977 por James Alwine, David Kemp y George Stark en la Universidad de Stanford.
NORTHERN BLOT
Pasos:
Como detectar la hibridación de la sondas con secuencia diana
para detectara la hibridación de sondas con secuencia diana, las sondas se marcan o se etiquetan con un marcador molecular de moléculas fluorescentes o radioactivo. los marcadores utilizado son fósforo es decir un isótopo radioactivo de fósforo incorporado en el enlace fosfodiester en el ADN de las sondas o digoxigenina, que no esta basada en anticuerpos radioactivos marcados.
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