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MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

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sarita espil fuentes

on 25 May 2015

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Transcript of MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

FUNDAMENTOS DE LA ILUMINACIÓN EN MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO
Es una técnica de iluminación que aprovecha la iluminación oblicua para mejorar el contraste de las muestras que no se visualizan correctamente con las técnicas de iluminación en campo claro.
Es un método sencillo y común que convierte en visibles los objetos no coloreados
La técnica de campo oscuro requiere el bloqueo de la luz central, que normalmente atraviesa y rodea la muestra, permitiendo que, solamente los rayos oblicuos de cada acimut “golpeen” la muestra. La lente superior de un condensador Abbe para campo oscuro es cóncava, lo que permite a los rayos de luz formar un cono hueco de luz invertida con un vértice centrado en la muestra.



MICROSCOPIOS DE LUZ POLARIZADA
Son microscopios a los que se les han añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador). El material que se usa para ello es un cristal de cuarzo y un cristal de Nicol, dejando pasar únicamente la luz que vibra en un único plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u oscuridad, según que los dos nicoles estén paralelos o cruzados.

HISTORIA
El microscopio de campo oscuro fue diseñado por el Físico Ricgard Zsigmond en 1903.
Este es un microscopio óptico estándar de laboratorio en el que ciertas técnicas ópticas son utilizadas para transformar la forma en la que la luz pasa a través de la muestra que se observa.



RESOLUCIÓN DE MICROSCOPIA EN CAMPO OSCURO

la capacidad de separar detalles y es expresado por el límite de resolución que es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos aparezcan individualizados

MÉTODOS PARA OBSERVACIÓN EN FONDO OSCURO
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

El microscopio de campo oscuro es un microscopio que utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen
FUNCION DEL MICROSCOPIO EN CAMPO OSCURO
Debido al ángulo de incidencia del haz luminoso sobre el espécimen que se va a observar, el microscopio de campo oscuro permite que el fondo sea oscuro y los bordes del espécimen aparezcan brillante. Esto es posible gracias al tipo de condensador que lleva este tipo de microscopio. La luz se dispersa al chocar contra la célula o muestra que se va a observar.

El microscopio de campo oscuro se encuentra catalogado entre los microscopios ópticos. Desde muchos años atrás el microscopio óptico posibilito el descubrimiento de las células y la elaboración de la teoría de que todos los seres vivos están constituidos por células. El microscopio óptico se compone de dos partes principalmente:
 
1.- Parte Mecánica: Sirve de soporte.
2.- Parte Óptica: constituida por tres sistemas de lentes.

Condensador
Objetivo
Ocular

Existen dos clases de condensador de campo oscuro:
CARDIODE
PARABOLOIDE
Ambos son utilizados con el mismo fin, pero el cardiode tiene mayor aplicabilidad en la investigación con Treponemas
CONDENSADORES EMPLEADOS EN MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO

CARDIODE:
Es un sistema de campo oscuro basado en espejos internos que proyectan un cono de luz hacia la muestra sin generar aberraciones
CARABOLOIDE:
Ambos son utilizados con el mismo fin, pero el cardiode tiene mayor aplicabilidad en la investigación con Treponemas.

Para que el efecto de campo oscuro se logre, la apertura numérica del condensador debe ser mayor que la del objetivo, lo cual ocurre con los objetivos de pequeño y gran aumento no así con los de inmersión los cuales deberán adicionarse de un diagrama de suspensión para la reducir la apertura numérica.


Lo que determina la riqueza del detalle de la imagen provista por un sistema óptico es su límite de resolución y no su poder de aumentar el tamaño de los objetos.

QUÉ SE PUEDE OBSERVAR CON ESTE TIPO DE MICROSCOPIOS
Diminutos organismos acuáticos vivos, diatomeas, pequeños insectos, huesos, fibras, cabellos, bacterias teñidas, levaduras, células sanguíneas y protozoos.

Entre las muestras no biológicas se incluyen: los minerales y cristales químicos, coloides, las muestras de polvo y las secciones delgadas de polímeros y materiales cerámicos que contienen pequeñas inclusiones o diferencias de porosidad. 


Aplicándolo a una muestra de sangre en vivo:
Las células sanguíneas habituales (eritrocitos, leucocitos y trombocitos) en estado saludable o patológico.
Residuos metabólicos (ácido úrico, colesterol, placas tóxicas digestivas, placas tóxicas ácidas, simplastos, etc.)
Agregaciones plaquetarias.
Partículas dispersas en un medio homogéneo.

Microscopio de campo oscuro con alto poder de aumentos
Si se desea obtener mayor precisión y un fondo más oscuro, se debe elegir un condensador especialmente diseñado para campo oscuro, es decir, que transmita sólo rayos oblicuos.

Hay diversas variedades: condensadores “en seco” para campo oscuro con aire entre la parte superior del condensador y la parte inferior de la preparación y condensadores de inmersión para campo oscuro que requieren el uso de aceite de inmersión (algunos están diseñados para ser usados con agua) para establecer una unión entre la parte superior del condensador y la parte inferior de la preparación.


La observación por reflexión con iluminación oblicua o anular es la mas frecuentemente utilizada con los microscopios estereoscopios o lupas binoculares. Generalmente no nos damos cuenta de que observamos en fondo oscuro cuando el material ocupa todo el campo visual.

OBSERVACIÓN POR TRANSMISIÓN (Fondo negro Anular):

 
La observación con iluminación anular de abertura superior a la del objetivo, es la única que, en la práctica corriente, se denomina campo oscuro. Debe indicarse que difícilmente puede utilizarse objetivos de gran aumento, de apertura numérica superior a 1.0. Dado que el condensador debe presentar una abertura superior a esta. Debe entonces practicarse la inmersión, evitando las burbujas de aire.

OBSERVACIÓN HAZ PERPENDICULAR (Fondo Negro ultramicrosopico):

La observación con un haz perpendicular a la dirección de la observación según Ziedentopf y Szimondy da informaciones sobre la orientación de las partículas observadas.Accesorios de campo oscuro Usados principalmente para especímenes no coloreados que son semitransparentes o transparentes.

NATURALEZA Y ESTRUCTURA DE LA IMAGEN EN FONDO OSCURO
Las imágenes en autentico fondo negro son remarcables por un efecto de borde, con numerosas franjas de difracciòn muy brillantes si le objeto es refringente.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Y PROCEDIMIENTO DE LECTURA
El material a estudio se emulsiona sobre un porta-objetos sobre el cual se coloca una gota de solución salina, se cubre con una laminilla y se monta sobre la platina se baja el condensador de campo oscuro y se corre con el carro de la platina la preparación de forma tal que al subir completamente el condensador la cara superior de su lente quede cubierta por su preparación solamente en su mitad posterior.


OBSERVACIÓN INCIDENTE O POR REFLEXIÓN:
OBSERVACIÓN POR TRANSMISIÓN (Fondo Negro Central):

La observación por transmisión con una pantalla central necesita la utilización de un objetivo con pantalla interna de Spierer; con una pantalla anular, la de Wilska: anoptral, versión original y no la fabricada industrialmente que es un contraste de fase negativa a fuerte absorción.


La observación de un objeto birrefringente entre nicoles cruzados da una imagen sobre fondo negro de naturaleza muy particular.

OBSERVACIÓN BIRREFRINGENTE ( Polarización):
VENTAJAS
DESVENTAJAS
Su aplicación al campo de la biología, la medicina y la educación para la salud:
Por supuesto esta técnica se utiliza en diferentes campos científicos. Sin embargo, fue el Prof. Dr. Günther Enderlein quien con su investigación sobre las células y el plasma sanguíneo le ha dado popularidad en el campo de la medicina biológica sobre todo en Europa y más específicamente en Alemania.
Definición de la microscopía de Campo Oscuro aplicada a la salud
Podríamos definir la Microscopia sanguínea en Campo oscuro como la técnica que estudia en vivo, sin tinciones ni sustancias añadidas la sangre humana para comprender mejor la salud del individuo: carencias y excesos relacionados con la alimentación, anemias, vitaminas, residuos tóxicos, predisposiciones patológicas
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