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Seroprevalencia de Bartonella henselae en médicos veterinarios de la VIII Región mediante la técnica de IFI.

TESIS PARA OPTAR AL TÍTULO PROFESIONAL DE MÉDICO VETERINARIO
by

Francisca Arteaga

on 20 April 2013

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Transcript of Seroprevalencia de Bartonella henselae en médicos veterinarios de la VIII Región mediante la técnica de IFI.

Revisión Bibliográfica Material y Método. Resultados y Discusión Sexo Conclusiones Sexo. Edad. Del Género Bartonella ... (Turner et al., 1960). PROFESORES GUÍA: Dra. KATIA ABARCA V.
Dr. IGNACIO TRONCOSO T.

PROFESOR INFORMANTE: TERESA AZÓCAR A. Seroprevalencia de Bartonella henselae en
médicos veterinarios de la VIII Región mediante la técnica de IFI. Aspectos Históricos. Escuela de Medicina Veterinaria
Concepción, 2013. 1950 La primera descripción de EAG fue realizada por el científico Frances Robert Debré. 1988 Se aísla y cultiva a partir de nódulos linfáticos de pacientes con lesiones características como :
linfoadenitis granulomatosa, microabscesos e hiperplasia folicular.

Denominada así como el bacilo de EAG
– Anfípia felis – 1983 Se comenzó a hablar de etiología bacteriana al detectarse bacilos en nodulos linfaticos de pacientes enfermos. (Wear et al., 1983). (Brenner et al., 1991; Alvarez, 2007). 1990 Retmal et al., mediante PCR aisla el gen bacteriano de biopsias de pacientes con angiomatosis bacilar, comparandolo y asociandolo en un 98,3% a la especie Rochalimaea quintana. 1990 Slater et al., y Perkocha et al., logran aislar bacterias perteneciente al mismo genero bacteriano a partir de sangre y tejido hepatico de pacientes con inmunodeficiencia. (Guptill et al., 2004). Francisca Arteaga Romero. Rochalimaea. Sp 1993 Brenner et al., descubre una homologia genetica del 97% entre las familias Rochalimaea y Bartonella. Bartonella henselae por Diane M. Hensel TESIS PARA OPTAR AL TÍTULO PROFESIONAL
DE MÉDICO VETERINARIO Pequeños bacilos de 0,5 – 0,6um ancho y 2um largo.

pleomórficos, Aeróbicos, Gram. ( - )

Crecimiento lento, de 12 a 14 días hasta 45 días en agar sangre

Se ubica dentro de los glóbulos rojos. Existen mas de 19 especies de Bartonella conocidas de las cuales 9 aprox son zoonóticas.

B. henselae y B. clarridgeriae tienen como principal reservorio y vector al Gato. Epidemiología Principales reservorios Distribución mundial Cornejo y Vizcarra, 1999) (Brenner et al., 1993; Birtles et al., 1995). (Guptill, 2002) Zoonosis Estacional (+/-)
Preferencia climas cálidos y húmedos. Presencia de Ctenocephalides felis, obligada. Niños mas afectados, 80% en <21 años. Grupo de riesgo
Niños he inmunocomprometidos. (Abarca et al., 2005) Prevalencia en gatos. Prevalencias (+) Mundial: 23-30 %.

EE. UU: 28%
Francia: 16,5% Prevalencia en personas. Centro de control de EE.UU estima una incidencia de 9,3 casos por cada 100.000 habitantes por año (1993).

Estudios en niños estimas prevalencias de:
15% en Grecia.
18% en Canadá.

En adultos
3- 6% en EE.UU, Hawai, Tailandia y Japón.
37% en Canadá

Riesgo ocupacional:
7-15% en EE.UU y Japón. Situación Nacional. Situación Mundial. Seroprevalencias en gatos Abarca et al., 2005.
Magnitud de la infección por Bartonella henselae en gatos durante los años 1997 – 1999. Muestrearon 187 felinos:
92 Santiago.
71 Valdivia.
24 Coquimbo. Predominio Global 85,6 % (+) IgG
(160/187). Stgo : 95,6% (+) Subgrupo de 60 animales 41,7%
(+)cultivo
(+) a PCR. Concepción Seroprevalencias en personas Abarca et al. 2006.
Determinaron anticuerpos IgG
anti-Bartonella henselae en sueros de niños sanos residentes en Santiago durante los años 1988 – 1990. Muestrearon
181 sueros de niños. 24 sujetos (+)
13,3 %, IFI IgG Se invitó a participar a Médicos Veterinarios y técnicos.
Valdivia y Santiago Se muestrearon 107 personas. 11 Sujetos (+)
10,3% IgG. Concepción Transmisión Las pulgas se infectan al ingerir sangre de un gato infectado.

La Bartonella se replica en su sistema digestivo (9d) y se excreta por las fecas.

El gato se infecta al contaminar sus heridas y picaduras de pulgas con fecas contaminadas o al lamer su pelaje. (Muñoz,2002). Se descartan las vías: Horizontal, venérea y transplacentaria o a través del calostro. (Gómez, 2001). La transmisión de Bartonella h. al hombre se describe por arañazo o mordedura de gato (Ballesteros, 2000). Al producirse la inoculación con heces de pulga infectadas con B. henselae por medio de una herida producida por el rasguño de gato o a través de las mucosas. El papel de la pulga como agente transmisor de la enfermedad al hombre aun esta en estudio, sin embargo existen casos de enfermedad sin contacto con gatos. Patogenia Síntomas Diagnóstico Tratamiento Prevención y Control InmunoCompetente S/Compromiso Extranodal Enfermedad Del Arañazo de Gato (EAG) 7 - 12 Días 15% Presentación Típica. Lesión Primaria: Sitio de Inoculación
(Mordedura / Rasguño). Papula o pústula
Eritematosa apruritica. 3 - 10 días 85 - 100% 2/3 Generalizada Localizada al lugar de la lesión Rompe la papula
formando una Costra
Regenera sin cicatrización 5 – 50 d (12 d aprox.) Linfoadenopatía
Dolorosas
1 – 10cm. Axilar Cervical Supra Clavicular Sub Mandibular. Inguinal 1/3 (Vega et al.,2010; Álvarez, 2007) La Linfoadenopatía suele ser autolimitante y remite después de 3 a 4 meses. Paciente
InmunoCompetente. EAG - Presentación Típica Paciente InmunoComprometido Linfoadenopatía - Localizada
- Generalizada Aumento de tamaño
Abscedación
Supuración Cambios Histopatológicos. Hiperplasia linfoide
Formación de granulomas con necrosis central
Formación de microabscesos Síntomas generales Fiebre
Malestar general
Cefaleas
Anorexia
Vómitos
Artralgias
Esplenomegalia
Exantema
Eritema nodoso
Purpura trombocitopenica Mialgias
(-) de peso (Orduña, 2003).
-Conjuntivitis no supurativa
-Granuloma conjuntival
-Linfadenopatía periauricular. Síndrome Oculo glandular de Parinaud (2 – 22%). Compromiso SNC: ª2% -Compromiso de nervios craneanos
-Encefalitis
-Neuropatías periféricas
-Meningitis
-Mielitis (> frec en Pacientes < 21 , 1ras 3 sem de infecc.) En síndrome febril prolongado
Dolor abdominal
compromiso sistemico

Aun en ausencia de adenopatías y/o anormalidades hepaticas Compromiso abdominal (Bass et al., 1997; Wolff et al., 2000) (Pérez et al., 2010) Fiebre prolongada
( - ) peso
Dolores óseos
Escoliosis Compromiso Óseo: 0.3% (Täger et al., 2000) (Navarrete et al., 2003) (Arisoy, 1999). (Wolff, 2000). Neumonía
Efusión pleural. Compromiso Respiratorio: 0.2% EAG - Presentación Atípica Compromiso Ocular -Retinitis -Coroiditis Resolución: 1-3 meses. -Neuritis Óptica. Fiebre
Ceguera transitoria, Convulsiones Encefalopatias
Coma. -Encefalopatías (+) frec niños 7-12 años. Fiebre (50%)
Convulsiones (40-50%) Resolución en 4 a 20 meses Abscesos Hepato-esplénicos. cuando B. henselae causa Granulomas necrosante en bazo e hígado vía: Hematogena Hepatitis Se sospecha de compromiso visceral Resolución lenta de 3 meses (Muñoz, 2002) Uní focal de localización variable: Predominando en : Vértebras y cerebral. (-) Frec: hueso iliaco, fémur, metatarso, Metacarpo, esternón, humero, acetábulo. Abscesos para vertebrales con compromiso infiltrativo y aplastamiento de cuerpo vertebral Artritis reactiva Osteomielitis. (si compromete columna vertebral) Angiomatosis bacilar: Peliosis hepatica Endocarditis Bacteriana. Bacteremia Proceso de proliferación vascular secundaria a la infección por B. henselae. Piel - mucosas - compromiso de hígado, bazo, medula osea y hueso. Inespecíficas: únicas o múltiples, tamaño variable, cutáneas o subcutáneas. pápula roja purpúrica, placas o nódulos pedunculados que tienden a sangrar profusamente. (Vásquez et al., 2007; Rodríguez, 2002) Diseminada: Fiebre - perdida de peso Proliferación vascular caracterizada por nódulos hepáticos constituidos por sinusoides dilatados y múltiples espacios lacunares llenos de sangre. Puede afectar también: Bazo, linfonódulos, médula ósea, pleura, pulmón, riñón, estomago y glándulas suprarrenales. + Síntomas gastrointestinales:
Nauseas
vómitos Variada y prolongada sintomatología. Malestar
fatiga
anorexia
perdida de peso Semanas a meses (Perkocha et al., 1990). Por Bartonella henselae, Bartonella Quintana. distensión abdominal. Fiebre, escalofríos y hepatoesplenomegalia. diarrea (Polanco et al, 2008) (Cornejo y Vizcarra, 1999) Biopsia ganglionar con histología característica + tinción de Warthin-Starry que demuestre bacilos típicos. Cuatro Criterios Básicos: Presencia de una adenopatía regional con historia de contacto con gatos 2 a 4 semanas antes. Exámen de punción ganglionar a fin de excluir otras posibles causas. Serología (+) por IFI frente a Bartonella henselae. (Martín y Gracia, 2006) Determina exposición a Bartonella henselae mediante la medición de títulos de anticuerpos IgG (memoria). (Anda et al., 2007). + Sensible y especifica para el D(x).

Permite diferenciar Especies y sub especies de Bartonella.

Detecta ADN en material purulento de ganglios, biopsias de tejido, fluidos corporales y suero.

Confirmación D(x). (Heredia et al., 2001) Biopsia de ganglio linfático o granuloma visceral. Detectan Bacilos pleomórficos
en grupos o cadenas cortas en
las zonas de necrosis. Tinción de Warthyn – Starry Granuloma con necrosis central que al fusionarse producen la formación de micro abscesos .
- Característico - Carece de utilidad práctica
Por difícil crecimiento y
difícil aislar de tejidos

Crecimiento lento en los medios habituales
( 6 semanas )
Poco rendimiento. Cultivo : sangre - Linfonodulos y otros tejidos. (Rodríguez, 2009). Paciente inmunocompetente : EAG Paciente inmunocomprometido Presentación Atípica Se considera un proceso autolimitante que sigue un curso benigno de larga duración hasta la curación. Tto se considera controversial. Estudios demuestran que el uso de antibióticos disminuye el curso del cuadro clínico Remisión en 2 a 6 meses Azitromicina 500mg 1er día
250 mg vía oral 5 a 7 días TTo sistematico de Atnb (Navarrete et al., 2003; Mathurin et al., 2008) Claritromicina, Rifampicina, Gentamicina, Cotrimoxazol, Ciprofloxacina. (Rodríguez et al., 2009) Tratamiento sintomático dependiendo del cuadro. TTo Indispensable Angiomatosis bacilar, Peliosis hepatica y Síndrome Bacterémico Doxiciclina. Eritromicina. (500 mg/4 veces al día) tto prolongados mas de 6 sem Otros antb: Tetraciclina, Minociclina, Amoxicilina, Claritromicina, Ciprofloxacino. Duración 2 a 3 meses min. (Cornejo y Vizcarra, 2001) Evitar actitudes que inciten a los gatos a rasguñar o morder.

Mantener uñas cortas

Lavar rasguños con agua y jabón.

Conducta interior del gato.

Control de ectoparásitos.

Precaución en el contacto de niños y personas inmunocomprometidas con los gatos. Objetivos. General Específicos. Determinar la seroprevalencia de Bartonella henseleae en médicos veterinarios de la VIII región, utilizando la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Determinar el número de médicos veterinarios con serología positiva a Bartonella henselae mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI-IgG). Caracterizar aquellos Médicos Veterinarios seroreaccionantes según las variables sexo y edad. Establecer el número de médicos veterinarios seroreaccionantes o no con antecedentes de mordeduras o rasguño de gato junto a la presencia de signología clínica compatible con enfermedad por arañazo de gato. Material y Método. Lugar de estudio Se realizó la toma de muestras sanguínea a un grupo de 40 Médicos Veterinarios provenientes de las ciudades de Concepción y Chillán. Requisitos de asistencia Estar inscritos en las sociedades de MEVEPA (Concepción) y Colmevet (Chillán). Ejercer su práctica diaria en animales menores Obtención de Muestra. Extracción por una enfermera 4 ml de Sangre Vena cefálica o Radial Tubos
Sin anticoagulante Traslado Hospital Clínico. UST Centrifugado 1000-1500 rpm 10 min Suero Tubos Eppendorf -20 °C Para el traslado y procesamiento. Distribución Para el análisis de los resultados se procedió a dividir a los Médicos Veterinarios en grupos según las siguientes variables: Sexo. Edad. Antecedente de mordedura o Rasguño Presencia de signología compatible con la enfermedad. + 25 a 34 años 35 a 44 años > a 45 años Método Diagnóstico INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA. Se utilizó el kit comercial Focus, el cual detecta anticuerpos séricos IgG específicos para Bartonella henselae. Las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Infectología y Virología molecular de la Pontificia Universidad Católica de Chile, Stgo. (Abarca et al, 2006). La sensibilidad esperada del ensayo es de 96% y su especificidad es de un 97% (Peter et al., 1994). Los sueros se trabajaron en dilución basal de 1:64 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA. Una vez trasladadas las muestras al laboratorio, se procedió bajo el instructivo del fabricante. (Focus, 2008). Sust. Buffer: 1 lt agua destilada Sueros en criotubos. 2 1 "Dilución madre"
900 µl de sustancia buffer en 100 µl (1x) de Dilución muestra (10x). Dilución en placas con micro pocillos 3 3 µl de la dilución 1:64 en cada pocillo determinado para cada suero. 20 µl control (-), c(+)directo y c (+) 1:8. Incubación en Cámara húmeda
30' a 37°C Lavado en agitación 10' en sust. buffer. 20 µl de conjugado IgG. Microscopio de fluorescencia
400x Observación de fluorescencia verde manzana brillante sobre bacilos fijados en el portaobjeto. Análisis Estadístico. Estudio de tipo descriptivo y transversal (estadística descriptiva) considerando para esto la frecuencia de presentación como porcentaje. Los resultados obtenidos fueron presentados de forma gráfica, utilizando el software Microsoft Office Excel 2007. Se utilizaron test no paramétricos (Chi cuadrado y test de Fisher) para el análisis entre las variables sexo, edad y antecedentes de mordedura y/o rasguño. RECOPILACIÓN DE ANTECEDENTES se recopilo información de datos epidemiológicos En forma adicional, se procedió a realizar una encuesta sexo Antecedente de accidentes (arañazo, mordedura) signología clínica compatible con la EAG Edad Antecedentes de contacto con gatos 1. Determinación del número de médicos veterinarios con serología positiva a Bartonella henselae mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI-IgG). Tabla 2. Seroprevalencia de Bartonella henselae en médicos veterinarios de las ciudades de Concepción y Chillán. 2. Caracterización de aquellos Médicos Veterinarios seroreaccionantes según las variables sexo y edad. (p= 0,5273). Tabla 3. Seroprevalencia de B. henselae según la variable Sexo. 2. Caracterización de aquellos Médicos Veterinarios seroreaccionantes según las variables sexo y edad. (p: 0,5869). Gráfico 1. Seroprevalencia de B. henselae según edad. Rangos Etarios. 25-34 años 35-44 años < 45 años 18 personas 10 positivas 55,6% Seroprevalencia 15 personas 8 positivas 53,3% 7 personas 2 positivas 28,6% Edad. 3. Determinación del número de médicos veterinarios seroreaccionantes con antecedentes de mordeduras o rasguño de gato más la presencia de signología clínica compatible con la enfermedad por arañazo de gato. Tabla 4. Seroprevalencia de B.henselae según antecedente de arañazo o mordedura. Antecedente de arañazo o mordedura. (p: 0,548). Manifestación de lesiones compatibles con EAG. Gráfico 2. Seroprevalencia de B.henselae según signologia compatible con EAG Inf. Local 27 personas 14 (+) - 52% Linfoadenopatia Local 2 personas 1 (+) - 50% Linfoadenopatia Generalizada 1 persona 0 (+) Pápula o pústula 2 personas 2(+) - 100% Sin Manifestaciones 8 personas 3(+) - 38% p: 0,69 p: 1 p: 1 p: 0,44 p>0,05: no hay diferencia estadística p>0,05: no hay diferencia estadística p>0,05: no hay diferencia estadística p>0,05: no hay diferencia estadística Según arañazo o mordedura Según manifestación de lesiones Se evidenció la presencia de serología positiva para Bartonella henselae en médicos veterinarios de la octava región, lo cual queda demostrado por la seroprevalencia obtenida del 50%. -El presente trabajo corresponde al segundo estudio donde se asocie serología positiva a Bartonella henselae en una población de riesgo ocupacional a nivel nacional y es el pionero dentro de la Octava región, a pesar de esto, deben realizarse más investigaciones que permitan conocer de mejor forma la epidemiología de ésta zoonósis, tanto a nivel local como nacional. -Un alto porcentaje de los individuos seropositivos presentaba como antecedente previo haber sufrido mordeduras o arañazos, siendo la manifestación clínica más frecuente la inflamación local en el lugar de la lesión. -Se logró determinar que el grupo de mayor seropositividad por sexo y edad, fueron los hombres y aquellos entre 25 y 34 años respectivamente, sin obtener diferencia estadísticamente significativa entre los diferentes grupos. Seroprevalencia Noah et al., 1997 Murayama et al., 2000. Ballesteros, 2000. Kumasaka et al., 2001 Abarca et al, 2006 Abarca et al., 2006 Nowotny et al., 1997 Noah et al., 1997 Kumasaka et al., 2001 Chmielewski et al., 2007 (Stgo - Valdivia) 107 sueros Med Vet - Tec Vet. IFI IgG B. henselae S: 10,3% loc
job (Styria, Austria) 137 sueros Med Vet. D(X) ? 24 dif Ag. Zoonoticos. S: 51,1% cond sim ag Exc info (Ohio, EEUU) 351 sueros Med vet, Tec vet, aux Vet. IFI IgG S: 7,1% 198 - 16 (+) 8% 132 - 9 (+) 6,8% (Tokio, Chiba) 233 sueros Med. Vet. Inmunoperoxidasa S: 15% S: 89,9 E: 91,3% 96%
97% (Polonia) 120 sueros Med vet 20, 9 (+) 45%
Alcohólicos 29, 14 (+) 48,3%
Propietarios 15, 8 (+) 53,3%
Donadores 50, 12(+) 24%
Drogadictos 6, s/(+) IFI IgG S: 35,8% (Stgo, Valdivia) 107 s 63 Hombres 4 (+) 6,3% 44 Mujeres 7 (+) 15,9% R. ocupacional S/D.E.S (Ohio, EE.UU) 351 s 116 Hombres 12 (+) 10,3% 225 Mujeres 13 (+) 5,8% S/D.E.S (Tokio y Chiba) 233 s v/s Hombres Doble de mujeres S/D.E.S (Valdivia) 22 s 9 Hombres 2 (+) 22,2% 13 Mujeres 2 (+) 15,3% (Tailandia) 163 s S/D.E.S IFI IgG 57 Hombres 4(+) 7% 106 Mujeres 5 (+) 4,7% La literatura menciona que en EE.UU la mayoría de los casos se reportan en hombres. Personas sanas sin riesgo ocupacional. Zangwill et al., 1993. Murayama et al., 2000 Noah et al., 1997. Ballesteros, 2000. No se encontraron estudios que asocien la seroprevalencia con personas con riesgo ocupacional. (Valdivia) 22 s 2 de las 13 Mujeres (+) 2(+) de los 9 hombres 25 a 34 años : > a 45 años : Estudio: 1,8 - 84 años Personas sanas sin riesgo ocupacional. Mayor Riesgo en Niños e inmunodeprimidos , < a 20 años. EE.UU - 2000 casos, 24000 d(x) al año , incidencia 9,3 x 100 mil h. 80% casos en niños de 2 - 14 años. - Principal linfoadenopatía benigna pediátrica. Chile - (Jackson et al., 1993; Bass et al., 1998; Maurin y Raoult, 1998; Zangwill et al., 1993) 13,3% en niños de Stgo. Concepción (Abarca et al., 2006) (Ohio, EE.UU) S/D.E.S (24/181) (Tailandia) 351 s 25 - 34 años : 85 personas - 4 (+) 4,7% 35 - 44 años : 126 personas - 7 (+) 5,6% > a 45 años : 122 personas - 14 (+) 11% D.E.S. 22,2% 15,3% 163 s 4 (+) 9 (+) 11 (+) 25 (+) 11 (+) 70 (+) 25 (+) 35 (+) 43 (+) 35 (+) 25 (+) 4 (+) 9 (+) 25 - 34 años: 35 - 44 años: > a 45 años: 5 (+) 56% (92,5%) (7,5%) /40 Abarca et al., 2006 11 107 p (11,2%) (Stgo, Valdivia) (Ohio, EE.UU) Noah et al., 1997 351 P = 98 (91,5%) 318 (90%) Mordedura 24 (7,5%) 334 (95%) Rasguño 25 (7,4%) Spv: 7,1% = 25p > n° de Gatos (-) en ohio 3 p (7,5%) 2 (+) 67% IgG. Perros?
garrapatas castor (Ixodes ricinus ) ?
pulgas de gato? (Yamanouchi et al., 2004; Hen et al., 2005). (Sange et al., 2003) (Abello et al., 2008; Cornejo y Vizcarra, 1999; Abarca et al., 1998) ´ Abarca et al., 2006 107p 21 (19,6%) Infección local. 5 (+) 23,8% Linfoadenopatía 7 (6,5%) 2 (+) 28,6% fiebre recurrente ´ 5 - 25% de los casos. Los Títulos se desarrollan 10 a 14 días después de la infección, por lo cual las primeras semanas la serología puede ser negativa. Existe reacción cruzada entre B. henselae y B.quintana (ambas asociadas a enfermedades similares). Limitación : Falta de especificidad en cuanto al genero de bartonella. Especificidad 97%. Sensibilidad 96%. 1:256 Mayor o igual determinan infección actual. 1:64 Determinan exposición a la bacteria. La oniquectomia y la eutanasia no son recomendadas bajo ningún caso. Encuesta. ´ 1 (+) 11% 1 (+) 11% ? : 2 (+) 22%
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