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microbiologia " Meios Cromogênicos"

CLASE VI
by

Nara Arantes

on 23 October 2013

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Transcript of microbiologia " Meios Cromogênicos"

Neumonía
Enfermedades de la piel como la dermatitis exfoliativa.
Síndrome del shock tóxico.
Intoxicaciones alimentarias
Mastitis
Impetigo
Bacteriemia – endocarditis, ostomielitis
enfermedades
puede sintetizar múltiples serotipos toxigénicos. Las enterotoxinas presentan alta termoestabilidad, requieren al menos 30 min a 100oC para ser destruidas.
La gran cantidad de toxinas aumenta la capacidad de daño.
Endógena:
Tejido traumatizado
Material médico contaminado
Alimento contaminado
Patogenicidad

Cocos agrupados (racimos irregulares)
Gram positivos
No son móviles ni forman pilis o flagelos
Morfología
Staphilococcus aureus
Exógena:
Heridas abiertas
Microrganismo como comensal.
Puede adquirirse de manera
Colonias de color amarillo/blanco
Anaerobios facultativos
37 grados
Se conocen 7 serotipos enterotoxigénicos diferentes: A, B, C1, C2 C3, D, E.
y el tipo B se detecta con mayor regularidad en infecciones intrahospitalarias
La toxina C3 se relaciona química y serológicamente con los serotipos C1 y C2,
pero diferente desde el punto de vista antigénico.
Las enterotoxinas A y D son las más frecuentemente asociadas con las intoxicaciones alimentarias,.
Enterotoxinas
FACTORES DE PATOGENICIDAD
MORFOLOGIA
bacilo Gram positivos (forman cadenas cortas. Se observan esporas cilíndricas subterminales.)
Beta hemolíticas con hemólisis

Las temperaturas de crecimiento: mínima están entre 15ºC a 20ºC y la máxima es entre 40ºC a 45ºC con una óptimo de 37ºC
enterotoxinas; durante su crecimiento exponencial:
formas clínicas de intoxicación alimentaría
El síndrome emético es causado por un péptido termoestable, tiene un período de incubación de 1 a 6 horas y predominan los síntomas como náuseas y vómitos.
Causan dolor abdominal y diarrea después de la incubación (entre 8 y 16 h),
Los síntomas duran 12-24 horas y en algunos pacientes pueden durar más tiempo, de 2 a 10 días
además, hay un crecimiento vegetativo de las bacterias en el intestino
la toxina diarreica
toxina emética
BACILLUS CEREUS
Produce:
Problemas intestinales graves.
Diarreas (presencia de sangre).
Infecciones urinarias.
Colitis hemorrágica.
Meningitis neonatal.
Trombocitopenia (coagulación en adulto).
Síndrome hemolítico urémico.
Enfermedades
Adherencia a enterocitos del colon.
Adherencia íntima (lesión).
Producción de toxinas:
Inhibición de sístesis protéica y daño celular.
SLT I y II  Daño sistémico que provoca el síndrome hemolítico urémico.
Otros: Toxina EAST 1, Enterohemolisina, LPS.
Factores de Patogenicidad
Escherichia Coli Enterohemorrágica
Anaerobio facultativo que crece a un pH óptimo (6.0-7.0) y a temperatura de 37° C
Mesófilo.
Crece en medio con glucosa.
Bacilo corto, no esporulado.
Gram negativo.
Flagelos perítricos.
Puede presentar plásmido.
Morfología
Sintomatología (ETA´S)
Período de incubación corto 2-4 horas.
naúsea, vómito, espasmos de estómago, arcadas y postración, diarrea, deshidratación, palidez y colapso nervioso
Curación completa en un plazo de 1-2 días.

Enfermedad
Escherichia coli enteroinvasiva (EIEC)

Diarrea sanguinolenta en niños y adultos
Impide la solidificación ósea, produciendo artritis
Arteroesclerosis, casualmente

Se debe al consumo de alimentos contaminados, este tipo de bacteria causa gran daño en el epitelio intestinal, no fermenta la lactosa.
MATERIAIS E MÉTODO
Tiene un periodo de incubación de 3 a 4 días aunque en ciertos casos puede presentar síntomas a las 12 horas.


GENERALIDADES:
Toxinas
Plásmidos transmisibles
Adhesinas (fimbrias tipo 1, fimbrias P)
Hemolisina (exotoxinas)
Bacteriocinas
Intercambio genético por transducción y conjugación
FACTORES DE PATOGENICIDAD
Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC)

Colitis hemorrágica
Síndrome urémico hemolítico
Trombocito peña

Bacterias productoras de la toxina citotóxica, cuya estructura se asimila a las toxinas producidas por la Shigella dysenteriae.

Dedos infectados o sucios de una persona a la boca de otra persona,
*Por no lavarse las manos debidamente después de cambiar un pañal de un bebé infectado
Modo de transmisión
enfermedades
Su papel más relevante es en el Sindrome hemolítico urémico, donde el efecto principal es el daño a nivel de vasos sanguíneos.
La invasión es la penetración activa de la bacteria en la célula huésped.
Invasividad
Los síntomas por lo general se presentan entre 1 y 3 días después de la exposición.

Entre los síntomas generales se encuentran:

Diarrea (puede contener sangre o moco)
Fiebre
Escalofríos
Cólicos abdominales
Náuseas /vómitos

Una pequeña cantidad de personas infectadas con shigelosis puede presentar dolor en las articulaciones, irritación de los ojos y dolor al orinar, lo que se conoce como síndrome de Reiter.
síntomas
la bacteria ingresa inicialmente por las células M, naturalmente fagocíticas, encargadas de captar antígenos de la luz intestinal
También se observa el ingreso a través de células no fagocíticas.
Toxinas:
La llamada toxina de Shiga, es potente neurotoxina, que determina convulsiones. Clásicamente se creía era producida exclusivamente por S.dysenteriae tipo 1.
Se han encontrado toxinas similares en otras especies de Shigella y en ciertas cepas de E.coli (Shiga like toxin).
Las complicaciones no son frecuentes. Cabe destacar el síndrome urémico hemolítico que es una complicación seria de la infección por S. dysenteriae tipo 1, productora de la toxina Shiga.
Cerca del 3% de las personas con infección por S. flexneri y con una predisposición genética pueden desarrollar el síndrome de Reiter que puede durar meses e incluso años, y puede causar una artritis crónica
El síndrome de Ekiri. se caracterizaba por fiebre elevada, convulsiones y compromiso de la perfusión tisular. La enfermedad tiene un curso rápido. La patogénesis del síndrome de Ekiri se desconoce
Las manifestaciones clínicas oscilan desde una infección asintomática o una diarrea leve hasta cuadros de diarrea acuosa
Al comer alimentos contaminados:
Carnes crudas o que no estén bien cocidas
Verduras sin lavar contaminadas en el campo con aguas negras
Al tomar agua contaminada o nadando en ella
Se han detectado dos tipos de antígenos
V y W
Factores de patogenicidad
Peste bubónica: es la más común, caracterizada por una hinchazón aguda y dolorosa de los ganglios linfáticos (bubón) correspondientes al sitio de la picadura por una pulga infectada
Enfermedades
Bacilo gramnegativo,
YERSINIA PESTIS
Móvil a 25 ºC pero no a 37 ºC,
No forma esporas y crece en condiciones aerobias y anaerobias
*Pierde su viabilidad en 2 a 3 días por simple desecación
Peste neumónica: es la menos común, pero la más peligrosa. En este tipo de peste, la bacteria entra en los pulmones y fácilmente se transmite de una persona a otra a través de saliva, tos y estornudos.
Peste septicémica: invasión del bacilo pestoso al torrente sanguíneo en forma masiva (bacteremia) seguido de localización en otros órganos tales como bazo, hígado, pulmones, meninges.
Con antígenos “O” somáticos y “H” flagelares entre los cuales tenemos 34 serotipos para Y. enterocolitica y 6 para Y. pseudotuberculosis
con una proteína en la superficie de su pared que es una adhesina y una enterotoxina termoestable TTE.
1. Agua: al menos el 80% de la bacteria es agua

2. Oxigeno: de acuerdo a la necesidad de oxigeno las bacterias pueden ser:

Nutrición y crecimiento

Morfología y agrupaciones

El estudios de la célula bacteriana se realiza por varios métodos:
microscopio, tinción y medio de cultivos



El microscopio es lo que utilizamos para poder visualizar los agentes microscópicos.




En el microscopio se estudian los frotis y las preparaciones en fresco. ( se utiliza un portaobjetos sobre el cual se deposita el microorganismo se deja secar y luego se le aplica colorantes).



La célula bacteriana

En el 1675 A. van Leeuwenhoek fabrica el primer microscopio.


En el 1860 Pasteur pasteurización, vacuna de la rabia, microorganismos del vino y la leche.


En el 1880 R. Koch(medico alemán) descubre el bacilo tuberculoso, diseña el método científico y crea unos postulados.


En el 1929 A. Fleming descubrió la penicilina.


En el 1978 la OMS declara erradica la viruela.

Recuerdo Histórico

3. Anhídrido carbónico.

4. temperatura: de acuerdo a la necesidad de la temperatura se clasifican en:
Psicrofilas por debajo de 20 C.
Mesofilas de 21 a 40 C.
Termófilas de 55 a 80 C.

La mayoría son mesófilas y crecen a 37 C. que es la temperatura corporal normal.

5. pH: el optimo 7.2

Diferencie entre célula eucariota y procariota

3. Medios diferenciales: se utilizan para determinar caracteres bioquimicos de las bacterias.
Ej. Las que producen peroxidasa (catalasas positivas)
Ej. Las que no producen peroxidasa (catalasas negativas).
Diferentes medios de cultivos

En una
enfermedad infecciosa
el microorganismo causante
se encuentra en el enfermo en todos los casos.


El microorganismo debe poder ser cultivado

a partir
de los productos o
secreciones del enfermo
en todas las ocasiones.


El microorganismo
debe
reproducir
la enfermeda
d cuando es inoculado a un animal susceptible.


El microorganismo debe poder ser cultivado a partir del animal de experimentación infectado.

Postulados de koch 1880

Estudian diferentes clases de microorganismo:
Virus – virología – antivirales
Bacterias – bacteriología – antibióticos o antibacterianos
Hongos – micología – antimicóticos o fungicidas
Parásitos – parasitología – antiparasitarios
microbiología:

Al crecimiento bacteriano fuera de su habitat ósea en un laboratorio se le llama crecimiento en cultivo.


Incubación: es cuando se deja el medio de cultivo en condiciones adecuadas para el desarrollo bacteriano.


Los medios de cultivos pueden ser de consistencia liquida o sólidos.
El recipiente donde se utiliza el medio de cultivo se llama placas de petri.

Medios de cultivos

Introducción a la
Es una rama de la biología que se encarga del estudio de los organismos microscópicos.
Es la ciencia que se encarga del estudio de la morfología(estructura y composición), función y enfermedades que producen los micro organismos.
Esta el microscopio óptico y el electrónico.
1. medios enriquecidos: contienen todos los requerimientos para que casi todas las bacterias crezcan en ella.
Ej. Sangre – agar sangre: diferencias a las bacterias en:
Hemolíticas positivas si destruyen la sangre.
Hemolíticas negativas si no destruyen la sangre.
Ej. Hemoglobina: agar chocolate
2. Medios selectivos: se añaden determinadas sustancias que favorecen el crecimiento de unas especies bacterianas e inhiben el crecimiento de otras.
Aerobias: necesitan el oxigeno para crecer

Anaerobias: Las que crecen en ausencia de oxigeno

Aerobias obligadas: no pueden crecer en ausencia de oxígeno ósea en presencia de CO2.

Anaerobias obligadas: no pueden crecer en presencia de oxigeno.

Bacterias facultativas: pueden crecer en presencia o ausencia de oxigeno. Ósea pueden usar tanto O2 como CO2.
A Identificação Direta Pelos Meios Cromogênicos é Confiável a Ponto de Dispensar as provas Bioquímicas?
Cuiabá MT-2013
Gilnara Ferreira Arantes
Wdson Kleber

URUCULTURA
A Urucultura é a análise mais realizada em laboratórios de Bacteriologia Clínica, uma vez que as infecções do trato urinário estão entre as patologias mais comuns em humanos.

URUCULTURA
Urina;
Ágar CLED;
Ágar Sangue;
Ágar MacConkey;
Estria ao centro em ziguezague.
URUCULTURA
OBJETIVO
MEIOS CROMOGÊNICOS
MEIOS CROMOGÊNICOS
Urucultura
MEIOS CROMOGÊNICOS

Ágar CLED

Ágar Sangue

MacConkey
Ágar


A metodologia tradicional permite identificar o patógeno em pelo menos 48 horas;

Sendo que em alguns casos quando se necessita em provas adicionais de identificação, o processo pode demorar alguns dias.

A introduzir os meios Cromogênicos para o plantio primário de amostras de urina;

Simplificar o processo e utilizar menor quantidade de meios de identificação de micro-organismos;

Verificar a confiabilidade dos Meios Cromogênicos a ponto de dispensar as provas Bioquímicas;

Reduzir o tempo de liberação final do exame agregando valor prático.

O meio Cromogênico revolucionou os testes microbiológicos por garantir a identificação presuntiva do microrganismo de acordo com a coloração que este apresenta no meio semeado.

MEIOS CROMOGÊNICOS
CPS ID 3 –Biomerieux;

Tais meios permitem a identificação direta dos principais uropatógenos
(Escherichia coli, Proteus mirabilis e Enterococcus spp.)
em 24 horas após incubação;

MEIOS CROMOGÊNICOS
Escherichia coli:

Produz uma enzima chamada de
ß-glucoronidase
, além de ser negativo para
ß-glucosidase.

A
coloração rosa
já é suficiente para a sua confirmação, sem necessidade de nenhuma prova adicional.

Figura 1. Colônias rosa e marrom
características de Escherichia coli e
Proteus mirabilis, respectivamente

MEIOS CROMOGÊNICOS
Proteus mirabilis :
Não produz as enzimas ß-glucuronidase e ß-glucosidase, a sua identificação ocorre devido a formação de colônias de
coloração marrom/castanho
oriundas da produção de
desaminase
no meio;

Mas apenas a coloração não é suficiente, sendo necessária a detecção do indol que deve ser negativo para sua confirmação.


Figura 1. Colônias rosa e marrom
características de Escherichia coli e
Proteus mirabilis, respectivamente

MEIOS CROMOGÊNICOS
Enterococcus spp.:

Produz uma enzima chamada de
ß-glucosidase
, sendo negativo para outra enzima, a ß- glucoronidase.

Esta bactéria desenvolve colônias no meio com
coloração azul turquesa
, necessitando apenas da realização do Gram da colônia;

Se na microscopia, a morfologia da bactéria for CGP, já é suficiente para confirmar sua identificação.
Figura 2. As colônias, azul turquesa
(esq.) e rosa (dir.) são características de
Enterococcus spp e Escherichia coli,
Respectivamente.

MEIOS CROMOGÊNICOS
MEIOS CROMOGÊNICOS
Será que a identificação dos meios cromogênicos é realmente confiável em nossa realidade, a ponto de dispensarem as provas bioquímicas?
MATERIAIS E MÉTODO
Laboratório Cendilab, localizado na cidade de Curitiba;

As urinas foram inoculadas no meio cromogênico CPS ID3 (Biomérieux) e incubadas a 37ºC por 18-24 horas.

As colônias com colorações características para as espécies identificadas presuntivamente foram separadas para confirmação e realização dos antibiogramas.

Quando a identificação presuntiva não era possível, a amostra era submetida à identificação bioquímica e antibiograma.

MATERIAIS E MÉTODO
As urinas foram inoculadas no meio cromogênico CPS ID3 (Biomérieux) e incubadas a 37ºC por 18-24 horas.

As colônias com colorações características para as espécies identificadas presuntivamente foram separadas para confirmação e realização dos antibiogramas.
Quando a identificação presuntiva não era possível, a amostra era submetida à identificação bioquímica e antibiograma.

MATERIAIS E MÉTODO
Laboratório Cendilab, localizado na cidade de Curitiba;
Foram realizadas 1.409 uroculturas;
Meio cromogênico CPS ID3;
Utilizando quando necessário provas adicionais confirmatórias;
Newprov.

MATERIAIS E MÉTODO
MATERIAIS E MÉTODO
Utilizou-se para confirmação da Escherichia coli e Proteus mirabilis um kit contendo cinco tubos desenvolvidos pela Newprov para identificação das enterobactérias Bacilos Gram Negativo.

Enterokit-Newprov
Registrou-se todas as culturas positivas em planilhas contendo informações como: iniciais dos nomes, idade, sexo, a bactéria isolada, biotipo, percentual, provas adicionais, etc;

As culturas mistas e/ou contaminadas foram consideradas negativas.

As amostras confirmadas diretamente foram separadas e numeradas para posterior confirmação bioquímica.

Confirmação de Escherichia coli e Proteus mirabilis
Lactose
MATERIAIS E MÉTODO
Para a prova da Lactose, necessária para complementar a identificação bacteriana foi utilizado o meio MacConkey e o teste em tubo Lactose, ambos desenvolvidos pela Newprov.

Enterococcus sp.
MATERIAIS E MÉTODO
Catalase
MATERIAIS E MÉTODO
Bili Esculina
Princípio:
Esculina presente no meio é hidrolizada, formando esculetina e dextrose. A esculetina reage com sais de ferro presentes no meio tornando-o enegrecido.

Interpretação:
Presença de cor enegrecida no meio é indicativa da presença de hidrólise, isto é, uma prova positiva.
RESULTADOS
No período entre 21/02/2005 e 29/03/2005, foram realizadas 1.409 culturas de urina;

220 foram positivas (15,6%);

1.189 (84,6%) de culturas consideradas negativas;

A grande maioria dos pacientes é ambulatorial, de ambos os sexos, e idade variando de recém nascidos a idosos.

Das culturas positivas, foram identificadas 19 diferentes espécies de uropatógenos;

As bactérias mais isoladas foram :

Escherichia coli 138/220;
Proteus mirabilis 11/220;
Enterococcus sp. 16/220.

RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
Resultados
Resultados
Resultados
Discussão
A discrepância ocorreu com uma bactéria que produziu a enzima
ß-glucoronidase
, apresentando coloração semelhante à
Escherichia coli
.
Provas Bioquímicas resultou no biotipo
2931
.
Provas adicionais: Sorbitol, VP (Voges-Proskauer) e Rafinose. Caracterizando bioquimicamente como
Enterobacter.
O laudo final resultou em
Enterobacter sp.
, biotipo

2933
.
O presente estudo demonstrou que 220/1.409 (15,6%) do total de culturas de urina realizadas foram positivas.

O Laboratório necessitou utilizar provas bioquímicas em 30,9% (68/220) das amostras positivas.
Em casos de exames ambulatoriais, a grande vantagem está no ganho de tempo de bancada pelo profissional do laboratório.

As colônias identificadas diretamente foram confirmadas pelas provas Bioquímicas em 99,3% ou 152/153 dos casos, resultado que comprova a eficácia da identificação do meio.
Discussão
Discussão
Discussão
As Bactérias citadas produtoras de
ß-glucoronidase,
incluindo o
Enterobacter sp.
encontrado nesse estudo, são
Indol negativos.
Prova de Indol

O teste de Indol é importante na distinção entre Proteus mirabilis e demais espécies de Proteus e, também, na distinção entre E. coli e Bactérias dos gêneros Klebsiella e Enterobacter.

Indol
Discussão
Discussão
1)
Por que o artigo afirma que a utilização da metodologia Cromogênica em exames ambulatoriais só é relevante no ganho de tempo em bancada?
2)
Que desvantagem é citada
no artigo com relação à
identificação direta dos meios cromogênicos?
3)
Qual a diferença entre
os meios cromogênicos
CPS ID2 e CPS ID3

de acordo com o artigo?
4)
Conforme relatado no artigo, a produção de
ß-glucoronidase,
não ocorre apenas em Escherichia coli. Portanto qual seria a sugestão dos autores para a confirmação de colônias rosa proveniente da produção dessa enzima?
5)
De Acordo com os autores as mudanças entre as versões dos meios cromogênicos ( CPS ID2 para CPS ID3) foram vantajosas?
Justifique a sua resposta.
6)
De acorco com os autores o que devemos considerar antes de incluir na rotina laboratorial os meios cromogêncos?
Obrigado!

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