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PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERINO Y TINCIÓN SIMPLE

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Samyra Santamaría

on 28 November 2015

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Transcript of PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERINO Y TINCIÓN SIMPLE

preparación de frotis
PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO Y TINCIÓN SIMPLE
La mayoria de bacterias carecen de coloración, resulta indispensable teñirlas para poder observarlas al microscopio y determinar su tamaño, morfologia y disposición relativa.

Para ello se emplea un único tipo de colorante; Azul de Metileno.
TINCIÓN
La fijación de una extensión bacteriana es imprescindible para que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio, de esta manera no se pierden los pasos de lavado necesarios para tinción.
FIJACIÓN DE BACTERIAS
La fijación de bacterias que se hallan en su propio medio de cultivo debe hacerse empleando un procedimiento alternativo como la fijación con metanol.

La fijación al calor no da en este caso buen resultado, pues la capade materia orgánica que contiene las bacterias, una vez realizada la extensión, tiende a despegarse con facilidad en los lavados posteriores.
PROCEDIMIENTO ALTERNATIVO
1. Colocar una pequeña gota de agua en un portaobjetos limpio.
2. Con el asa de siembra previamente flameada transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota. Remover la mezcla hasta formar una suspensión homogénea y extenderla para facilitar su secado.

NOTA: Si el material de partida es un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar estos 2 primeros pasos. Basta con colocar y extender una muestra de la suspensión bacteriana directamente sobre el portaobjetos.
PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO
5. Cubrir los frotis con abundante colorante uno de ellos con cristal violeta y el otro con safranina. Dejar actuar los colorantes durante 1 o 2 minutos.

6. Lavar las preparaciones con agua para eliminar el exceso de colorante. Inclinar el portaobjetos y aplicar el chorro de agua en su parte superior permitiendo que resbale sobre el frotis.

7. Eliminar la máxima cantidad de agua de los portaobjetos golpeandolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo.

8. Esperar hasta que el líquido se evapore.

9. Observar la preparación al microscopio con el objetivo de inmersión.
La preparación de un frotis o extensión sobre un portaobjetos se imprescindible para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permite la observación de bacterias en el microscopio.
1. Tomar una pequeña cantidad de cultivo bacteriano.
2. Extenderla en un portaobjetos limpio y fijar.
Si las bacterias se encuentran resuspendidas en agua, la fijación puede hacerse por calentamiento de la muestra sobre el portaobjetos.
Es importante no excederse en este proceso para que las bacterias no se deformen o se rompan.

3. Esperar hasta que la fina película de líquido se evapore o bien acelerar este proceso con un ventilador o un secador.
4. Fijación de las bacterias al vidrio portaobjetos:
a) POR CALOR pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el portaobjetos entre los pases.
b)CON METANOL añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Retirar inmediatamente el exceso de metanol del portaobjetos, golpeandolo por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo.
TINCIÓN SIMPLE
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