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Universidad de los andes Facultad de farmacia y Bioanálisis

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by

Jorgelio Guivar

on 29 September 2014

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Transcript of Universidad de los andes Facultad de farmacia y Bioanálisis

Materiales
Universidad de los Andes
Facultad de farmacia y Bioanálisis
Escuela de Bioanálisis
Mérida –Venezuela.

Introducción
DETERMINACIÓN DE METABOLITOS DE
COCAÍNA EN ORINA DE CONSUMIDORES DE TÉ DE COCA POR INMUNOCROMATOGRAFÍA Y CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADO A ESPECTROMETRÍA DE MASA

Bachilleres:
CORBAG N, YAMILE
MONTAÑA. G. MARIA A.
Tutor: M.Sc. ALEXIS MORALES
CO-TUTOR: Dr. LUIS ROJAS

La hoja de coca pertenece a la familia de las plantas tropicales llamada Erythroxyláceas
Generalidades
Mate de coca
Las hojas de coca
Cocaína (Clorhidrato de Cocaína). Principio activo ( benzoiletilecgonina), con ph alcalino.
Generalidades
Tabla 2: Diferentes formas de consumo
Lizasoain I; Moro, M. A; Lorenzo, P. Cocaína: Aspectos Farmacológicos. Madrid (España); 2007.
Generalidades
Muestras Biológicas
Antecedentes
Justificación
Autores han detectado metabolítos de cocaína en la orina de consumidores de este tipo de té por técnicas inmunocromatográfica, es necesario su identificación a través de métodos confirmatorio como la cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa.
Objetivos
Objetivo General
Objetivos
Objetivos específicos
Problema
En consumidores de té de coca, podría causar problemas de tipo legal y social en la población que tiene como habito el consumo de esta infusión.
Orina
Métodos y Técnicas Analíticas
Inmunocromatografía
Cromatografía de gases y Espectrometría de Masa
Zavaleta Castro de la Mata
Zavaleta Castro de la Mata
Determinación de Benzoilecgonina en la orina de consumidores de mate de coca. Y confirmaron la presencia de metabolitos urinarios de cocaína, en todos los sujetos que ingirieron la infusión de una bolsa filtrante de mate de coca comercial.
Velasquez y col.
Velasquez y col.
Detección de benzoilecgonina en orina de consumidores de té de coca mediante métodos de inmunoensayo
Gallasi Ramírez Gerardo
Gallasi Ramírez Gerardo
Comparación entre el contenido de benzoilecgonina en orina de bebedores de té de coca y de coqueadores con el de adictos. Su objetivo era encontrar los parámetros que permitan diferenciar un consumidor de té de coca o coqueador de un adicto a la cocaína.
Determinar cocaína y sus metabolítos en orina de consumidores de té de coca por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa.
Determinar la presencia de cocaína, benzoilecgonina, ecgoninametil ester, ecgonina, en orina, después de la ingestión de té de coca mediante cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa
Establecer el tiempo de presencia de la cocaína y sus metabolítos después del consumo del te de coca mediante inmunocromatografía y cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masa
Comparar el tiempo de duración de la cocaína y sus metabolítos utilizando el método de inmunocromatografía y cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masa.
Hipótesis
Si las hojas de coca seca, produce los mismos metabolítos que la cocaína ingerida en forma de clorhidrato, deberíamos encontrar la presencia de benzoilecgonina, ecgoninametil ester y ecgonina en la orina de consumidores de té de coca
Materiales y Métodos
Reactivos
Equipos
Paso Nº 1
Antes de tomar el té, a cada uno de los voluntarios se le realizara una determinación cualitativa en orina, de cocaína y sus metabolítos (concentración inicial)
CG-EM
Personas sanas entre 23 y 53 años
Luego de tomado el té, se tomará nuevamente la muestra de orina
Té de coca (Coca NASA)
IC
CG-EM
IC
Cromatografo de gases Heweltt- Packard modelo 6890
Detector de masa Heweltt- Packard modelo 5973
Columna capilar HP-5
Resultados y Discusión
Tabla N°5. Resultados obtenidos de las muestras de orina de los voluntarios antes de ingerir la infusión del té de coca (Nasa Esh’s Coca Nasa) por los métodos empleados en el estudio.
Resultados y Discusión
Resultados y Discusión
Materiales y Métodos
Fuente: Laboratorio de Toxicología Analítica Dr. Pablo Paredes Vivas de la Facultad de Farmacia y Bioanálisis de la Universidad de los Andes / Instituto de Investigación de la Facultad de Farmacia y Bioanálisis
Tabla N° 7. Resultado del análisis por el método de inmunocromatografía a las muestras de orina de los voluntarios después de ingerir la infusión de té de coca (Nasa Esh’s Coca Nasa)
Fuente: Laboratorio de Toxicología Analítica Dr. Pablo Paredes Vivas de la Facultad de Farmacia y Bioanálisis de la Universidad de los Andes.
Tabla N° 8. Resultado del análisis por el método de cromatografía de gases acoplado a espectrometria de masa en las muestras de orina de los voluntarios después de ingerir la infusión de té de coca (Nasa Esh’s Coca Nasa)
Fuente: Laboratorio de Toxicología Analítica Dr. Pablo Paredes Vivas de la Facultad de Farmacia y Bioanálisis de la Universidad de los Andes.
Conclusión
De acuerdo a los resultados obtenidos con los métodos utilizados en esta investigación, se detectó cocaína en las muestras de los consumidores de té de coca (NASA Esh´s Coca NASA) mediante el método cualitativo de inmunocromatografía (cocaína one step-stat pack) y cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa.

Mediante el método de inmunocromatografía (cocaína one step-stat pack) se obtuvo resultado positivo para cocaína y sus metabolítos en muestras de orina de consumidores de té de coca (Nasa Esh’s Coca Nasa) desde la primera hora hasta las 48 horas del estudio, no coincidiendo este resultado con el obtenido mediante el método de cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa el cual fue hasta las 24 horas.

Con el tratamiento de muestra utilizado en este trabajo, y las condiciones analíticas de la cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa no se pudo deterrminar benzoilecgonina, ecgoninametil ester, ecgonina.
Inmunocromatografía
Cromatografía de gases y espectrometría de masa
Población objeto de estudio
Muestras de pacientes participantes
Criterios de inclusión
Análisis estadístico
Tratamiento de la Muestra
CONDICIONES DEL EQUIPO (CROMATOGRAFO DE GASES ACOPLADO A MASAS)
Se realizó en un equipo Hewlett-Packard modelo 6890 serie II, provisto con columna capilar HP-5 (5% fenil - 95% metil silicona) de 30 m de longitud y 0,25 mm de diámetro interno, con un espesor de pared de 0,25 m. Se utilizó Helio como gas portador, a un flujo de 1 ml/min. Las condiciones utilizadas fueron las siguientes: Temperatura inicial: 150 ºC (0 min); temperatura final: 300 ºC; gradiente de temperatura: 20ºC/min; temperatura del inyector: 250 ºC; La identificación de los componentes se realizó mediante comparación computarizada de sus espectros de masas con los de la base de datos del equipo (Librería Wiley, Sexta Edición).
Extracción
de la
Muestra

Estadística
Cromatogramas y espectros de masas de dos muestras con mayor concentración de cocaína en consumidores de té de coca, obtenido bajo las condiciones optimizadas del sistema
Fig 7. A
Recomendaciones
De acuerdo a los fundamentos teóricos, a las conclusiones realizadas en este estudio y a los conocimientos se recomienda lo siguiente:
1.- Realizar estudios para establecer diferencias entre consumidores de té de coca, con los de cocaína
2.- Ejecutar una mejor extracción de la muestra, ya sea con Etanol u otro solvente orgánico para así poder determinar la presencia de otros metabolítos de la cocaína.
3.- Tener presente que el analista siga rigurosamente cada paso en el procesamiento de la muestra desde el momento de la extracción, rotulación e inyección de la muestra en el equipo de cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa.
Zavaleta, Alfonso; Castro de la Mata, Ramiro. (2001). Detección de metabolitos de cocaína en orina de consumidores de mate de coca. Área de investigaciones CEDRO, Lima, Perú. Disponible: http://www.cedro.org.pe/ebooks/Psicoactiva19p3-6.pdf. [Consultada Septiembre 2009] ; František Starý. Plantas Venenosas (1993); Hokche. A; Berry. Paul E.; Humbers O. nuevo catalogo de la flora vascular de Venezuela (2008).

Es una bebida milenaria, consumida por ser estimulante y energizante, y tener efectos curativos, carecen de efectos tóxicos es de libre comercio en algunas regiones andinas como Perú, Bolivia, la zona sur de Brasil y al noreste de Argentina.
Especie de planta con flor sudamericana de la familia eritroxilaceas
Fragmentos ionizados
Iones moleculares
Moléculas no ionizada
Analizador: donde cuantifica según su valor masa/carga
Es una técnica que usa un complejo de antígeno y anticuerpo para da un resultado perceptible .
Criterios de Inclusión
Análisis estadístico
Técnicas
Estadísticas básicas de la función de supervivencia para el evento.
Se observa que el riesgo, resultado positivo para cocaína.
El coeficiente de Long Rankn tiene un criterio de decisión en función de un nivel significativo del 5%
El analito de interés se reconoció mediante un detector selectivo de masa comprando los patrones de fragmentación, con los encontrados en la biblioteca del equipo.
Se les garantizó confidencialidad al momento de la utilización de los datos para lo cual dieron su consentimiento.
Los datos obtenidos fueron procesados mediante el software SPSS, versión 18, cuyo análisis consistió en:
1. Estimación de la Función de Supervivencia de Kaplan y Meier, en base a la observación del riesgo, resultado positivo de cocaína y sus metabolítos.
2. Comparación de los métodos de inmunocromatografía y cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masa, mediante el coeficiente Log Rank (Mantel-cox)
Gracias por su atención.
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