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IDENTIFICACIÓN DE DNA EN RESTOS ÓSEOS

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Erick Gutierrez

on 27 November 2013

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Transcript of IDENTIFICACIÓN DE DNA EN RESTOS ÓSEOS

IDENTIFICACIÓN DE DNA EN RESTOS ÓSEOS
Consideraciones
Después de la muerte las biomolécula comienzan a degradarse por medio de enzimas y agentes externos, sin embargo aunque las moléculas alteren su forma sus componentes persisten.
Dificultades
Existe dificultad para cuantificar y caracterizar la cantidad de ADN recuperado, debido a que el ADN de huesos antiguos puede arrastrar impurezas u otros agentes biológicos como hongos y microorganismos.

Métodos de Extracción
La mayoría de los métodos de extracción de ADN de huesos implican la pulverización del hueso, su descalcificación con EDTA y la utilización de algún método estándar de extracción de ADN.

OSTEOMETRÍA
La osteometría realiza la reconstrucción del perfil osteo-biológico

Convencionalmente la identificación de restos se realizaba mediante análisis y comparación de huellas dactilares, radiografías esqueléticas o dentales y por presencia de marcas como tatuajes o cicatrices.
La extracción de DNA a partir de restos óseos es una herramienta muy utilizada en el ámbito forense para la identificación de cadáveres de individuos que no presentan en su anatomía tejidos blandos o bien cuando presentan un grado de deterioro en tejido, por descomposición, daño o por quemaduras.

La tecnología del DNA ha surgido como una poderosa herramienta no solo en el
ámbito forense
sino también en
genética de poblaciones
e
investigaciones evolutivas
, por ejemplo, se ha recuperado ADN antiguo de insectos atrapados en ámbar de hace unos 120 millones de años , de plantas fósiles de 17 millones de años; así también de momias egipcias de hace 2400 años, huesos de soldados de Vietnam de 1980.

La forma de preservación más importante del ADN es en los dientes y en los huesos, donde la molécula queda comprimida entre los cristales de fosfato de calcio, también el hueso actúa como una barrera física a factores externos tales como la luz ultravioleta y los microorganismos.
Dificultades
Técnicas
Descalcificación
Lavado del ADN
Extracción sin Descalcificar
Metodo de Hoss y Pääbo
Incubación del hueso pulverizado con muchos cambios de buffer que contienen EDTA 0.5 M (potente secuestrador de calcio).

Utilizado para separar el DNA del al fosfato de calcio, de tal manera que este no cause alguna inhibición en la PCR, evita que el material recuperado del huesos expuestos al medio ambiente venga con alguna asociación microorgánica.

Desventajas: el tiempo que consume es elevado, lo laborioso que resulta y que el EDTA empleado debe ser removido totalmente de la extracción para prevenir la inhibición de la PCR.

Otro método de extracción de ADN de huesos está basado en el lavado del ADN en columnas de fosfato de calcio por incubación en altas concentraciones de fosfato de sodio.

Este método recupera mucho menos ADN, sin embargo, el ADN recuperado de esta forma permitió la amplificación de un ADNmit de 900 pb de longitud, mientras con los otros métodos las amplificaciones no fueron mayores de 150 pb.
Existe un procedimiento que consiste en calentar el polvo de hueso por 2 horas a 95°c y el método de Chelex, donde la muestra se hierve en presencia de una matriz quelante. Las extracciones con Chelex no son estables por largos períodos de tiempo, se obtiene sólo ADN de hebra simple y expone el ADN antiguo a potenciales daños por altas temperaturas.

Con la extracción directa de ADN del polvo de hueso, se obtuvo más del doble de ADN, que en el método estándar con descalcificación, sin embargo el material obtenido tenia mas impurezas.
Método de extracción para ADN antiguo usando sílica (fuerte afinidad del ADN) en presencia del desnaturalizante isotiocianato de guanidina, que ayuda en la desasociación de las macromoléculas.

Esta técnica tiene dos ventajas, primero se elimina rápida y efectivamente los inhibidores de la PCR. Segundo, se emplean pocos pasos y reactivos, minimizando así la exposición a contaminación con ADN moderno. 
PCR
Análisis
Cualitativo
Electroforesis
Espectrofotometria UV
La espectrofotometría es usada para identificar compuestos por su espectro de absorción y conocer la concentración de un material o sustancia, permitiendo conocer la concentración de compuestos y determinar enzima y proteínas o ácidos nucleicos.

Un espectrofotómetro es un equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por medio de una longitud de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un medio es proporcional a la concentración del soluto presente. Las muestras en estos equipos se utilizan en estado liquido y se colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaños y materiales.
ADN Mitocondrial
El ADNmit amplificado a partir de restos esqueléticos, es de especial valor para propósitos de identificación en el campo forense, ya que:

El ADNmit es heredado a través de línea materna, por lo que cada individuo tiene solamente un tipo de ADNmit.

Las células tienen solamente dos copias del genoma nuclear, pero cientos de miles de copias del genoma mitocondrial.
OSTEOMETRÍA
OSTEOMETRÍA
Se utilizan métodos homogenizados y estandarizados para la observación de características métricas con el fin de reconstruir parámetros demográficos traumáticos.

Somatometría.- investiga el cuerpo como tal, con fines de registrar la forma del hombre en su variabilidad cronológica.

Antropometría.- Analiza cuantitativamente el organismo humano.

Aplicación del Método Odontológico en Cadáveres Quemados
Fundamentalmente en los accidentes, produce una calcinación total o parcial, por los incendios.

Los cadáveres carbonizados tienen que ser manipulados cuidadosamente. Es necesario proteger cualquier muestra de utilidad para la investigación.

En los cuarpos severamente quemados, las determinaciones antropométricas son muy difíciles, disminuyen claramente sus dimensiones.
Los investigadores tienen problemas para identificar los cadáveres calcinados.
La aplicación sistemática de métodos odontológicos en las identificaciones permiten alcanzar los mejores resultados.
Las quemaduras corporales se clasifican en cinco categorías.

1er grado: se caracteriza por quemaduras superficiales.

2do grado: permite observar áreas de la epidermis destruidas.

3er grado: se aprecia destrucción de la epidermis y dermis y áreas de necrosis en tejidos subyacentes.

4to grado: incluye destrucción total de la piel y tejidos profundos.

5to grado: se ubican los restos cremados.


La identificación por procedimientos odontológicos se realiza comparando los registros postmortem con la historia clínica odontológica.

Resistencia de los dientes y las restauraciones estéticas realizadas en la boca.
Suextracción debe hacerse descubriendo las paredes externas alveolares, hasta ver claramente toda la raíz. Luego se puede separar el diente fácilmente sin forzarlo. De esta forma, se garantiza la integridad de la estructura.
Bibliografía Consultada:
TP5:
Cuantificación de ADN y electroforesis en gel de agarosa:
http://ibcmunq.files.wordpress.com/2010/03/tp5.pdf universidad Nacional de Quilmes. 25/11/2013 15:30.

Krenzer, Udo.
Compendio de Métodos Antropológicos Forenses
:
http://bibliotecabiologia.usal.es/sistema%20oseo/Compendio_de_Metodos_Antropologico_Forenses_Udo_Krenzer.pdf 25/11/2013 16:00.

Criminalistica
:

http://criminalistica.mx/areas-forenses/antropologia-forense/1045-burned-corpses-forensic-anthropological-study 25/11/2013 16:20.

La Huella Genética
: http://www.gorgas.gob.pa/museoafc/loscriminales/criminologia/huellagenetica.html 24/11/2013 11:00.

Palafox, Juan Lopez.,
Muerte por carbonización, metodología de inmortificación, aplicación de la odontología forense:
http://www.maxillaris.com/hemeroteca/200204/forense.pdf 24/11/2013 10:25.

Brenes, Bernal Morena (et. al.), I
dentificacion de restos oseos humanos mediante analisis de ADN,
Costa Rica: Scielo. v. 15, n.1-2 Heredia dic. 1998.

Arce, Gerardo Jiménez (et. al.),
Revisión sobre la extracción de ADN partir de huesos humanos,
Costa Rica: Scielo. v. 16, n.1-2 Heredia dic. 1999.



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