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Laboratorio de Biologia

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by

Valentina Acevedo Rojas

on 13 September 2013

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Laboratorio de Biología
Propiedades de las proteínas
Realiza la práctica experimental, controla variables, identifica y registra respuestas a cerca de las propiedades de las proteínas
Materiales:
Huevo
Leche
Gelatina sin sabor
Jeringa
Agua destilada
Filtro de tela
Cuchara
Tubos de ensayo
Vaso de precipitado
Alcohol etilico
Práctica 2:
Reacciones coloreadas
4. Hidrólisis de proteínas


La hidrólisis de proteínas es la ruptura de la estructura primaria, es decir la ruptura de la secuencia de una proteína. La hidrólisis de las proteínas termina por fragmentar las proteínas en aminoácidos.

Existen 3 tipos de hidrólisis :

Hidrólisis ácida:
Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con soluciones ácidas fuertes (HCl y H2SO4). Este método destruye completamente el triptófano y parte de la serina y la treonina.

Hidrólisis básica:
Respeta los aminoácidos que se destruyen por la hidrólisis anterior, pero con gran facilidad, forma racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH).

Hidrólisis enzimática:
Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividad es lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce racemización y no se destruyen los aminoácidos; por lo tanto es muy específica.
La practica experimental
HCl:
Alcohol Etílico:
Albúmina:
La proteína se desnaturaliza y queda una solución de color blanco. Se coagula.
Leche:
No hubo reacción quimicamente. Se produjo una mezcla homogenea.
Gelatina:
No se observa ninguna reacción.



Hidroxido de sodio
Sulfato de cobre
Reactivo de Biuret
Reactivo de Millon
Albumina
HNO3
NH3
HCl
1. Desnaturalización de proteínas:
La desnaturalización de una proteína se refiere a la ruptura de los enlaces que mantenían sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservándose solamente la primaria. En estos casos las proteínas se transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan hasta formar compuestos fibrosos e insolubles en agua. Los agentes que pueden desnaturalizar a una proteína pueden ser: calor excesivo; sustancias que modifican el pH; alteraciones en la concentración; alta salinidad; agitación molecular; etc... El efecto más visible de éste fenómeno es que las proteínas se hacen menos solubles o insolubles y que pierden su actividad biológica.



Fundamento Teórico
Baño Maria:
Albúmina:
Se ve visiblemente una reacción. La proteína de la albúmina se coagula.
Leche:
No se ve visiblemente alguna reacción. No hay coagulación de proteínas.
Gelatina:
No se ve visiblemente alguna reacción. No hay coagulación de proteínas.

Práctica 1: Desnaturalización de proteínas
Albúmina:
La proteína se desnaturaliza y provoca un cambio en su color, este cambio es irreversible en la proteína y en su estructura.
Leche:
Debido al cambio de pH, la proteína se desnaturaliza al entrar en contacto con el ácido. Aparecen grumos.
Gelatina:
La proteína se desnaturaliza.



3. Reacción Xantoproteica
Es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido.








2. Reactivo de Biuret
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Reactivo de Millón
El reactivo de MILLON es una mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en ácido nítrico.
En contacto con proteínas, los compuestos mercúricos en medio fuertemente nítrico (reactivo de Millón) se condensan con el grupo fenólico del aminoácido tirosina, formando complejos de color rojizo. El precipitado se torna blanco lechoso y se separa la parte blanca .
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria.
Técnica: 9 tubos de ensayo así:
A. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (previamente diluir la clara en un poco de agua para obtener una mezcla espesa)
B. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad (2-3ml) de leche.
C. Colocar en otros 3 tubos solución de gelatina sin sabor previamente disuelta en agua tibia
Llevar uno de los tubos de cada muestra al baño María. Añadir a otro tubo de cada una de las muestras 2-3ml de HCl concentrado y al tercero de los tubos de cada muestra añadir 2-3ml de alcohol etílico.

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
Técnica
Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%. En otro un pedazo de la capa de la cascara del huevo (Esta práctica consiste en determinar la composición de una fina capa que se encuentra adherida a la cáscara del huevo por su parte interior. Esta estructura está presente en tejidos como el conjuntivo fibroso, formado principalmente por fibras de colágeno (proteína), Para comprobar que la capa analizada está compuesta de proteínas)
A cada tubo añadir 4-5 gotas de solución de CuSO4 al 1%. Y 3ml de solución de NaOH al 20%.
Agitar para que se mezcle bien.

Procedimiento y resultados
Práctica 3:
Reconocimiento de proteínas
El objetivo de esta práctica consiste en reconocer la presencia de proteínas en la clara de huevo. Para ello utilizaremos la prueba Xantoproteica.
En el caso de haber proteínas en la clara de huevo, al añadir HNO3 y calentarlo, ésta debe tomar un color amarillo suave, y al añadir NH3 deberá tomar un tono anaranjado.
Técnica
Tenemos clara de huevo en un vaso de precipitado. Tomamos una muestra con una jeringuilla y la vertemos en un tubo de ensayo. Añadimos el HNO3 y calentamos, una vez cambie añadimos NH3 observa y toma datos

Experimentalmente, al hacer la reacción, esta dio positiva.
*¿Cómo se manifiesta la desnaturalizacion de la clara de huevo?
La desnaturalizacion de proteinas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albúminas en agua. En los huevos frescos , la clara es transparente y líquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa sólida intercomunicada. Esa misma desnaturalización química, por ejemplo volcándola en un recipiente con acetona.
Desnaturalización irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida de solubilidad, causadas por la alta temperatura.
*¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.
*¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína, se utiliza el reactivo de Biuret, que detecta la presencia de proteínas. El reactivo de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.
*¿Qué coloración da la reacción de Biuret?
La coloración que presenta es el color violeta, indicando la presencia de proteínas.
*¿Una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret?
Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70ºC al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
Si, una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier proteína, liquida o sólida.


*Si se realiza la reacción de Biuret sobre un aminoácido como la glicina ¿es positiva o negativa? ¿por qué?
La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta manera, la glicina dio una prueba negativa. Además en la reacción xantoprotéica da negativo porque carece de grupos aromáticos.
Conclusiones
Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones.
Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de los aminoácidos.
Al realizar las diferentes pruebas con albúmina se pudo comprobar experimentalmente que efectivamente se trata de una proteína.
En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de la proteína, mientras que en la coagulación se produjo un cambio en el estado físico y en la estructura química, por eso es irreversible.
Preguntas
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