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TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR: ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN (RFLP), SSCP, SOUTHERN BLOT, NORTHERN Y WESTERN BLOT.

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Andrea Ramírez

on 23 August 2011

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TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR: ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN (RFLP), SSCP, SOUTHERN BLOT, NORTHERN Y WESTERN BLOT.
GENÉTICA DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS is here is important is important too Andrea Ramírez
Tatiana Rincón Estos métodos utilizan una cadena sencilla de ADN marcada por un método físico-químico, puede ser con radiactividad o con un fluorocromo. Esta cadena de ADN tiene una secuencia de nucleótidos conocida y se utiliza como sonda para detectar otras moléculas de ARN o ADN de cadena sencilla de secuencia parecida SOUTHERN BLOT (ADN CELULAR) ENZIMA DE RESTRICCIÓN:
Con la que el ADN es dirigido ELECTROFORESIS:
Mediante la cual los fragmentos son separados por tamaños en un gel. DESNATURALIZACIÓN: De los fragmentos de ADN de doble cadena mediante un proceso químico y se forma ADN de una hebra. Hibridación:
Sobre un filtro de nitrocelulosa, queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel. Incubación:
Durante un tiempo con la sonda marcada se va hibridando a las moléculas de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria. VIDEO SOUTHERN NORTHERN BLOT
(CADENA DE ARN) El ARN se extrae Se fracciona en tamaños variables mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida El proceso continúa de forma semejante a la hibridación de tipo Southern NORTHERN Se utiliza para realizar estudios de expresión génica para conocer qué genes están activos formando ARN mensajero en qué condiciones, en qué tejidos o tipos celulares. Este requiere transferir moléculas de ARNm separadas a una membrana y exponerlas a una sonda de DNA radioactiva seleccionada.
No es utilizado para conocer el tamaño de los ARN WESTERN BLOT (PROTEÍNAS) Procedimiento Proteínas separadas por electroforesis Se unen a un filtro Se incuba en una solución con un anticuerpo contra la proteína Anticuepo encuentra a la proteína
correspondiente. Se utiliza un enzima
cromogénica 2 1 3 4 5 De esta forma se puede estudiar la presencia de la proteína en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto a otras proteínas.

DATOS IMPORTANTES:
El Western blot fue desarrollado en el laboratorio de George Stark, en la Universidad de Stanford.
El nombre (Western, occidental en inglés) le fue dado por W. Neal Burnette5 , y consiste en un juego de palabras con una técnica análoga pero que usa DNA, el Southern (sureño) blot, que en este caso debe su nombre a su descubridor, Edwin Southern. SIMILITUDES Y DIFERENCIAS EN LOS PROCEDIMIENTOS POLIMORFISMO ¿ QUÉ ES ? Es una variación en la secuencia de un lugar determinado del ADN entre los individuos de una población, las copias de un gen de una población no son exactamente idénticas. Sustitución de una simple base nitrogenada Se produce polimorfismo de un nucleótido individual cuando la diferencia entre los genes comparados ya tiene el tamaño de una base.
La variación debe aparecer al menos en el 1% de la población POLIMORFISMO DE LONGITUD DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN - RFLP Se usa como marcador para identificar grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades, en ciencia forense, en pruebas de paternidad ya que puede mostrar la relación genética entre individuo DNA de diferentes personas cortados con la ayuda de enzimas de restricción se diferencian en la cantidad y tamaño ALEC JEFFREYS CASOS: INMIGRACIÓN UN JÓVEN ORIGINARIO DE GHANA, 99,99% Probabilidad JOSEF MENGELE ADN extraído de un hueso del esqueleto con el ADN del hijo de Mengele, 99,94% de probabilidad ADN era idéntico al de la oveja donante OVEJA DOLLY COLIN PITCHFORK Violó y asesinó a dos niñas, la primera en Narborough, Leicestershire, el 21 de noviembre de 1983, y la segunda en Enderby, también en Leicestershire, el 31 de julio de 1986. Fue detenido el 19 de septiembre de 1987, y condenado a cadena perpetua el 22 de enero de 1988, después de admitir ambos asesinatos. 2000 2010 2005 2002 March (cc) image by jantik on Flickr Head Body Body Body Body Body Body Body Body Body Body Body Body ¿Qúe es y para qué sirve una enzima de restricción? Proteínas de origen bacteriano Endonucleasas 1200
endonucleasas
de restricción Capacidad de cortar
las moléculas de DNA
bicatenario en sitios
determinados de
la secuencia Cada restrictasa
reconoce y corta
una secuencia
nucleotídica
particular MICROSATÉLITES
(SSR (Short Sequence Repeat)
ó
STR (Short Tandem Repeat) SON SECUENCIAS
DE ADN LA VARIACIÓN EN EL NÚMERO DE REPETICIONES CREA DIFERENTES ALELOS En el ADN se produce cuando un patrón de dos o más nucleótidos y las secuencias se repiten adyacentes el uno al otro. El patrón puede variar en longitud de 2 a 50 pares de bases (pb). Spark (cc) image by nuonsolarteam on Flickr VNTR(número variable de repeticiones en tándem) Es una ubicación en
un genoma en una breve
secuencia de nucleótidos
que se organiza
como una repetición
en tándem. Se pueden encontrar
en muchos cromosomas Pueden mostrar

las variaciones de
longitud entre
los individuos Cada variante actúa como
una herencia de alelos. Es útil en la genética y la biología de investigación, análisis forense , y la huella dactilar del ADN . SNP
( Polimorfismo de nucleótido simple) Es una variación en la secuencia de ADN Afecta a una sola base (adenina (A), timina (T), citosina (C) o guanina (G)) de una secuencia del genoma. Un ejemplo de un SNP es la alteración del segmento de ADN:
AAGGTTA a ATGGTTA
donde la segunda "A" en el primer fragmento se sustituye con una "T". Un método para la detección de SNP es por medio del polimorfismo en la longitud de fragmentos de restricción (SNP-RFLP). SSCP
(Single Strand Conformation polymorphims). Usado como marcador genotípico
Se utiliza para descubrir nuevas cadenas de polimorfismo, aparte de una secuencia de ADN
Detecta mutaciones en la inf. genética de los virus GRACIAS Del genero y la
especie del que
se ha aislado. TÉCNICA DE DETECCIÓN DE HUELLA GENÉTICA ELANÄLISIS DE STR ES UNA TECONOLOGÍA QUE SE USA EN CIENCIA FORENSE PRUEBAS DE PATERNIDAD Y CARTOGRAFÍA,
TASA DE MUTACIÓN
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