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Determinación de azúcares reductores por el método DNS

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by

Adriana Magallanes

on 16 February 2014

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Transcript of Determinación de azúcares reductores por el método DNS

Determinación de azúcares reductores por el método DNS
- Se pesará el ácido 3, 5-dinitrosalicílico, el tartrato de Na-K y el NaOH.

- Posteriormente se disolverá el NaOH en agua destilada y se añadirá con agitación el tartrato de Na-K lentamente.

- Se añadirá agua destilada hasta completar un volumen especifico.

- Posteriormente se agregará lentamente el DNS.

-Se dejará en agitación toda la noche, se aforará y se filtrará.

DESARROLLO DE LA REACCIÓN DEL DNS
En tubos de ensaye de 10 mL se adicionarán muestras previamente preparadas y reactivo de DNS.
Preparación del extracto enzimático
Se tomarán muestras de 5 mL durante la fermentación a los tiempos estipulados.

Las muestras se centrifugarán a * rpm durante 5 min a 4 ° C.

Los sobrenadantes se utilizarán para la determinación de actividades enzimáticas.
Fundamento de la técnica
Consta de una reacción redox entre el ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) y los azúcares reductores presentes en la muestra.
1. Oxidación de la maltosa en el grupo hidroxilo del carbono 1. Es necesario calentar la muestra.

2. Proporcionar un medio alcalino (adición de NaOH), permitiendo la oxidación de la maltosa.

3. El DNS se reducirá gracias a la adición de tartrato de Na y K y de la oxidación de la maltosa.


- El ácido perderá una de sus configuraciones 3 ó 5, ... ácido 3- amino 5-nitrosalicílico.

- Se producirá una coloración amarilla-- rojo.

- Se frenará la reacción con hielo, para que la maltosa adquiera nuevamente su configuración.
Preparación del reactivo del ácido 3,5-dinitrosalicílico
En el laboratorio...
Los tubos se colocarán en baño de agua a 100° C por 5 min.
Posteriormente se adicionarán 2.5 ml de agua destilada a cada uno de los tubos, se agitará y se realizarán las determinaciones de absorbancia (540 nm).
En seguida la reacción se detendrá al pasar las muestras a un baño de hielo durante 5 minutos.

Ecuación de la recta: y=mx+b
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