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Cromatografía de Exclusión molecular

Cromatografía de exclusión molecular
by

Alejandra Ruiz

on 24 April 2013

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Transcript of Cromatografía de Exclusión molecular

CROMATOGRAFÍA DE
EXCLUSIÓN MOLECULAR
(FILTRACIÓN POR GEL)

Daniela Peña
Sebastian Morales Separa moleculas por su tamaño.
La moleculas de mayor tamaño pasan mas rapidamente que las de menor tamaño.
No hay una interaccion atractiva entre la "fase estacionaria" y el soluto.
La fase movil liquida o gaseosa pasa a traves del gel poroso. ¿En que consiste? Los poros son bastante pequeños para excluir a los solutos grandes, pero no a los pequeños.
Las moléculas grandes pasan de largo sin entrar en los poros.
Las moléculas pequeñas tardan mas tiempo porque penetran dentro del gel. Ecuacion de Elucion En cromatografia de exclusion molecular, el volumen de la fase movil (Vm ) se llama, normalmente, volumen vacio, V0. La cantidad de Km se define como

Km= (Vr- V0) / (Vt- V0 )

donde Vr es el volumen de retencion de un soluto y Vt el volumen total de la columna.

- En cromatografia de exclusion molecular pura, todas las moleculas se eluyen entre 0-1. Mecanismo de exclusión molecular Fases estacionarias Entre los geles utilizados en columnas abiertas de exclusion molecular, a escala preparativa, se encuentran el Sephadex:
- Es un polisacárido lineal.
- Las moléculas de glucosa están unidas mediante enlaces α–1,6.
- El producto resultante, comercializado con el nombre de Sephadex G.
- Es insoluble en agua, pero hidrofílico. Los geles de poliacrilamida, comercializados con el nombre de Bio-Gel P, se preparan por copolimerización de la acrilamida con N,N'-metilenbisacrilamida y su estructura puede representarse así: Aplicaciones - La separación de dos grupos de sustancias con pesos moleculares muy diferentes.
- La técnica, conocida como desalinización, es útil, por ejemplo, para la separación de hemoglobina y cloruro sódico.
- El fraccionamiento de mezclas más o menos complejas de Cromatografía líquida de diferentes materiales, como péptidos, ácidos nucleicos, enzimas, polisacáridos, etc.
- Determinación de pesos moleculares comparando los volúmenes de elución de patrones. Conclusiones * Metodo de separacion por tamaño molecular.

* Las moleculas eluyen por orden decreciente de tamaño molecular INSTRUMENTACIÓN La técnica utilizada por el ruso Tswett es aún vigente en laboratorios de investigación de productos naturales y en la industria farmacéutica. En esta modalidad de cromatografía la fase estacionaria está empaquetada en un recipiente cilíndrico de plástico, vidrio o metal abierto por los extremos, llamado columna.
* Diametro interno: 10-15 mm
* Relleno de la columna: Lecho cromatografico El paso de fase móvil a través de la columna se llama elución. La elución de los solutos se registra mediante un sistema de detección adecuado y se denomina cromatograma o perfil de elución cromatográfico. http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/cromat/crom-exclusion.html
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