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Electroforesis

Biologia Molecular
by

Jesus Espinoza

on 16 November 2014

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Transcript of Electroforesis

Principios Gernerales
Diferentes enfoques del proceso
¿Que es la Electroforesis?
Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
Electroforesis
Separa partículas en base a movimiento inducido por un campo eléctrico.
Se aplica un campo eléctrico durante un periodo de tiempo dado a través de una matriz que contiene una mezcla de macromoléculas con diferentes potenciales de superficie.
Las moléculas estarán en diferentes lugares al detener el campo.
Tecnicas electroforeticas
Electroforesis Capilar
Western Blotting
Pueden ser distinguidos por propiedades físicas de la muestra o por el tipo de matriz usada; Son:
Límite móvil
Electroforesis de zona
Isoelectroenfoque
Electroforesis en geles
Electroforesis capilar
Electroforesis en papel
Electroforesis de transferencia
Agarosa
Rígidos y fácil de manejar. Se utilizan para separar moléculas grandes como proteínas y ADN.
Es apropiada para la electroforesis debido a que es casi neutra.
Composicion: residuos alternantes de D-galactosa y 3,6- anhidro-L-galactosa, concadenas laterales de 6-metil-D-galactosa.
Obtención de gel para electroforesis
Se calienta la agarosa y el buffer, hasta disolver agarosa.
Se vuelca en un contenedor hasta que se enfríe y se gelifique.
Se sumerge en solución buffer
Aplicar campo eléctrico para realizar la corrida.
Armado de Gel Agarosa
1
2
3
Transposición de la electroforesis en gel de poliacrilamida o de agarosa.
El capilar se rellena con electrolito que contiene el gel
Se produce efecto de filtración, que retrasa a las grandes moléculas y minimiza los fenómenos de difusión.
Electroforesis Capilar en Gel
Electroforesis Capilar en Zona
Procedimiento mas habitual.
El capilar es recorrido por un electrolito atreves de un medio buffer que puede ser acido, base o anfotero.
El flujo electroosmotico crece con el medio electroforético.
Tecnica Clasica
Utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito.
Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente.
Se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira.
La distancia de migración se mide en relación un marcador interno.
Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.
GRACIAS POR SU ATENCION
Armando Gonzales
Jesus Espinoza
Diana Franco
Lizeth Corona
Isarel Juarez
Saul Cardenas
Dulce Espinosa
Ruben
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