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Culture cellulaire végétale - Cours 3

Chapitres 5 et 6
by

Sophie Roy

on 5 February 2016

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Transcript of Culture cellulaire végétale - Cours 3

Chapitre 5 Problèmes associés à la culture in vitro
Chapitre 6 Callogenèse et suspensions cellulaires

Cours 3
Chapitre 5 Problèmes associés à la culture in vitro
Variations somaclonales
Chapitre 6 Callogenèse
Cals
Prochaine rencontre
Chimères
Hyperhydratation
Brunissement du milieu
Monoculture
Des facteurs à considérer
Variations somaclonales
Somaclone :
clone provenant ¢ somatiques
Variations somaclonales:
Génétiques
Mutations
Épigénétiques
Variations phénotypiques observées chez les plantes cultivées in vitro
: Altérations nbr, taille et forme des chromosomes
: Altération à des gènes spécifiques
: Altérations liées à des modif. dans l'expression des gènes. Transitoires et réversibles. Dédiférenciation.
Origine de l’explant
Ajout de régulateur de croissance synthétique (2,4-D, NAA)
Grand nombre de repiquage
Applications
oranges navel
pommes de terre
pamplemousses roses
pommes
Chimères
Chimères initiées dans méristème apical
1-Chimères à partir de cals
Tuniques et corpus
Malformations chez plantes in vitro
feuilles apparences vitreuses
Hyperhydratation
Causé par exsudats de la plante
Composés phénoliques
Tanins
Brunissement
Définition
Cals
Cals
Culture de cellules végétales en milieu liquide
Cals
Organes
Ex : racines
Suspensions cellulaires
Blesser explants ou autres matériels végétals
Induction
Comme matériel de départ
organogenèse
embryogenèse somatique
régénération de plantes entières
Applications
Au laboratoire (projet 1, étape 2) :
Désinfection et ensemencement d’explants et de graines
Préparez les protocoles 1 et 2
1 spécimen végétal par personne
1 semence (germination rapide) par personne
Variégation: apparition dessins, taches, bandes causées par la présence de pigments spéciaux ou l'absence de pigments normaux
Chimères
Chimères méristématiques:
Périclinales
Mériclinales
Comment l’obtenir ?
Une plante chimérique peut-elle donner une descendance chimérique ?
Sectorielles
Plantes à plus d'un génotype
+ fréquentes + stable
- fréquentes
+ rare et instable
Tunique L1: épiderme foliaire, floral et caulinaire
Tunique L2: Parenchyme, marge foliaire, gamètes, pélales et tige
Corpus L3: Parenchyme spongieux, vaisseaux, racine, centre de la tige et des feuilles
Comment obtenir des chimères?
2-Greffe (couche de ¢ jonction greffon/porte-greffe)
3-Fusion de protoplastes
Suspensions
Induction
Applications
Maintien du cal, surtout auxines (2,4-D)
Induction avec bon ratio d’hormone (auxines et cytokinines)
Callogenèse = formation de cals in vitro
Formation après blessure
Tissu cicatriciel
Masse de tissu parenchymateux ± organisé
Repiquer fréquemment (attention diminue capacité régénération!)
Division cellulaire
Dédifférenciation sur bon milieu (ratio auxine/cytokinine)
Mesures de la croissance cellulaire
Poids humide et poids sec
Décompte cellulaire
Centrifugation des cellules
Renouvellement milieu idéal aux deux semaines (backups)
Applications
Production de métabolites secondaires
Amélioration et transformation génétiques
Conservation de génotypes
Recherche fondamentale
Pas pour la micropropagation
En théorie :
Lire et compléter notes de cours
Chapitre 7 : Organogenèse et régénération
Devoir 1 à remettre sur LÉA mardi prochain
Utilisation d'agents mutagènes, toxines, fortes concentrations en sel, froid...
Limite: les modifications apparaissent au hasard et peu sont intéressantes...
géraniums
asperges
céréales
2,4-D très important pour l'induction et le maintien des cals
Sarrau doit toujours être mis en premier (avant lavage de main) et enlever en dernier (après lavage de main)...
p.86
L1
L2
L3
L1
L2
L3
L1
L3
Cryopréservation dans l'azote liquide:
Suspensions cellulaires
Embryons somatiques enrobés d'une couche protectrice
Cryopréservation au frigo:
Cals
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