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Ch 11.2 et 11.7-Culture cellulaire végétale - Cours 3

Chapitres 5 et 6
by

Sophie Roy

on 15 February 2018

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Transcript of Ch 11.2 et 11.7-Culture cellulaire végétale - Cours 3

Trop d'eau disponible
Humidité et température élevés
Chapitre 11.2 Callogenèse
Chapitre 11.7 Problèmes associés à la culture cellulaire végétale

Cours 3
Chapitre 11.7 Problèmes associés à la culture cellulaire végétale
Variations somaclonales
Chapitre 11.2 Callogenèse
Cals
Prochaine rencontre
Chimères
Hyperhydratation
Brunissement du milieu
Monoculture
Des facteurs à considérer
Variations somaclonales
Somaclone :
clone provenant ¢ somatiques
Variations somaclonales:
Variations génétiques
Variations épigénétiques
Variations phénotypiques observées chez les plantes cultivées
in vitro
: Altérations nbr, taille et forme des chromosomes, mutations gènes spécifiques
Type de tissu cultivé
Ajout de régulateur de croissance synthétique (2,4-D, BAP)
Grand nombre de repiquage
Applications
oranges navel
pommes de terre
pamplemousses roses
pommes
Chimères
Chimères initiées dans méristème apical
1-Chimères à partir de cals
Tuniques et corpus
Malformations chez plantes in vitro
feuilles apparences vitreuses
Hyperhydratation
Causé par exsudats de la plante (Composés phénoliques, tanins)
Brunissement
Définition
Cals
Cals
Culture de cellules végétales en milieu liquide (même milieu que solide sans agent gélifiant)
Suspensions cellulaires
Blesser explants ou autres matériels végétals
Méthode
Comme matériel de départ
organogenèse
embryogenèse somatique
régénération de plantes entières
Applications
Au laboratoire (projet 1, étape 2) :
Désinfection et ensemencement d’explants et de graines
Préparez le protocole 4.4
1 spécimen végétal par personne
1 semence (germination rapide) par personne
Panachure: apparition dessins, taches, bandes causées par la présence de pigments spéciaux ou l'absence de pigments normaux
Chimères
Chimères méristématiques:
Périclinales
Mériclinales
Comment l’obtenir ?
Une plante chimérique peut-elle donner une descendance chimérique ?
Sectorielles
Plantes à plus d'un génotype
+ fréquentes + stable
- fréquentes
+ rare et instable
Tunique L1: épiderme foliaire, floral et caulinaire
Tunique L2: Parenchyme, marge foliaire, gamètes, pélales et tige
Corpus L3: Parenchyme spongieux, vaisseaux, racine, centre de la tige et des feuilles
Comment obtenir des chimères?
2-Greffe (couche de ¢ jonction greffon/porte-greffe)
3-Fusion de protoplastes
Suspensions
Induction
Applications
Maintien du cal, surtout auxines (2,4-D)
Callogenèse = production de cals
in vitro
à partir de matériel végétal divers ensemencé sur un milieu contenant bon ratio d’hormones végétales (auxines et cytokinines)
Formation après blessure
Tissu cicatriciel
Masse de tissu parenchymateux ± organisé
Repiquer sur milieu favorisant le maintien de la différenciation en ¢ parenchymateuses (milieu riche auxine)
Division cellulaire et différenciation en ¢ parenchymateuses
Dédifférenciation des ¢ adultes en ¢ juvéniles ou méristématiques sur bon milieu (ratio auxine/cytokinine)
6.3 Méthodes d'évaluation de la croissance cellulaire
Masse humide et masse sèche
6.3.1 Méthode directe par comptage des cellules
Volume des cellules compactées
Meilleur croissance que sur milieu solide. Renouvellement milieu idéal aux deux semaines (backups)
Applications
Production de métabolites secondaires
Amélioration et transformation génétiques
Conservation de génotypes
Recherche fondamentale
Pas pour la micropropagation
En théorie :
Lire et compléter notes de cours
Chapitre 11.3 : Organogenèse et régénération
Devoir 1 à remettre sur LÉA vendredi prochain
Utilisation d'agents mutagènes, toxines, fortes concentrations en sel, froid...
Limite: les modifications apparaissent au hasard et peu sont intéressantes...
géraniums
asperges
céréales
2,4-D très important pour l'induction et le maintien des cals
Sarrau doit toujours être mis en premier (avant lavage de main) et enlever en dernier (après lavage de main)...
L1
L2
L3
L1
L2
L3
L1
L3
Cryopréservation dans l'azote liquide:
Suspensions cellulaires
Embryons somatiques enrobés d'une couche protectrice
Cryopréservation au frigo:
Cals
Repiquer fréquemment au 3 à 6 semaines (attention diminue capacité régénération!)
Cals
Organes (Ex : racines)
Besoin d'agitation pour défaire les amas de ¢ et pour une bonne oxygénation
Avec hématimètre
6.3.2 Méthodes inderects
Comprendre mécanismes de développement des tissus et organes
Étude des mécanismes de division cellulaire
Étude des facteurs de croissance et régulation
Propriétés de régénération des ¢ (totiptence)
Processus menant à la dédifférenciation cellulaire
Organogenèse
Embryogenèse
somatique
Régénération
: Altérations liées à des modif. dans l'expression des gènes. Transitoires et réversibles. Dédiférenciation.
(chromatine condensée)
Génotype
Maintien de chimères
Bourgeon apical
Bourgeons axilaires
Les bourgeons conservent l'état chimérique
Repousses adventives ou embryons somatiques proviennent d'une seule ¢, perte de l'état chimérique
Mettre des antioxydants, (acide citrique, acide ascorbique)
Absorber les composés avec charbon activé ou polyvinylpyrrolidone
Repiquer souvent les culture pour éliminer déchets
Causée par:
Désinfection
Manque de lumière
Mauvais échange gazeux
NH
Milieu MS NH NO 1650 mg/L
Milieu B5 (NH ) SO 134 mg/L)
Cytokinines
+
4
4
4
3
2
2
10 000 ans on cultivait 10 000 espèces
Aujourd'hui on en cultive 150, dont 12 espèces comptent pour 80% de notre apport d'É
Blé, riz, maïs et patate = 60% des cultures
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