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미생물 관찰

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by

주연 박

on 26 March 2014

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Transcript of 미생물 관찰

미생물 관찰
그람염색
제 4장
실험목적
지난 실험에서 김치와 요구르트에서 분리 배양한 세균을 그람 염색하여 그람 양성균과 그람 음성균으로 감별하여 세균의 세포벽의 구조와 성분을 이해하고
그람 염색
의 주요원리와 실험법을 익힌다.

그람염색법
그람 염색법(Gram Staining)은 1884년 덴마크의 의사인 한스 크리스티안 그람이 고안한 특수 염색법이다.

탈색되지 않는 균을 그람 양성균, 탈색되는 균을 그람 음성균 이라고 한다. 세균의 세포벽의 구조와 성분의 차이에 따라 염색액의 투과성에 차이가 생겨 다르게 염색되기 때문에 두 군으로 분류한다.

Bacillus anthracis bacteria

Pseudomonas aeruginosa bacteria

그람 양성균
세포벽의 80-90%가 펩티도글리칸으로 구성되어있으며, 그람염색법에 의하여 크리스탈 바이올렛에 물들어 보라색으로 변하는 세균이다. 포도상구균 ·연쇄상구균 ·폐렴균 ·나병균 ·디프테리아균 ·파상풍균 ·탄저균 ·방선균 등 병을 일으키거나 항생제를 생산하는 세균이 여기에 해당된다. 색소나 약제에 대한 감수성이 높으며, 대사작용에는 아미노산과 비타민을 필요로 한다.

그람음성균
세포벽의 펩티도글리칸 층이 얇기 때문에 그람염색법으로 염색하였을 때 ,크리스탈 바이올렛-매염제 복합체가 세포벽을 빠져 나와 보라색은 탈색되고 사프라닌으로 붉게 염색되는 세균. 그 종류로는 살모넬라균 ·이질균 ·티푸스균 ·대장균 ·콜레라균 ·페스트균 ·임균 ·수막염균 ·스피로헤타 등이 포함된다. 일반적으로 트리페닐메탄계나 아크리플라빈 색소에 대한 저항력이 강하고 계면활성제에도 내성이 강하다. 또 생존에 필요한 영양요구가 간단하여 단순한 구성의 배양액에서도 잘 자란다.


왼쪽 그람양성균은 펩티도글리칸 층이 두꺼운 것을 볼 수 있고 오른쪽 그람음성균은 그람양성균에 비해 펩티도글리칸 층이 얇은 것을 볼 수 있다
그람양성균과 그람음성균의 세포벽차이
실험기구 및 재료
김치와 요구르트에서 분리 배양한 세균, slide glass, cover glass, gram crystal violet, gram iodine, decolorizer, gram safranin, pipette, D•W(증류수), 백금이, 알코올 램프, 현미경

시약의 역할
Crystal violet : 염기성 색소로 세균을 염색한다.(그람양성균 염색)
Iodine : 크리스탈 바이올렛으로 염색된 세균에 처리하면 불용성 복합체를 형성하여 착색시켜 준다.
Alcohol : 불용성 복합체를 용해해 탈색제 역할을 한다.
Safranin : 염색체를 분홍색으로 염색하는 염료이며 대비염색재로 쓰인다.(그람음성균 염색)

실험방법
1. Side glass를 깨끗이 닦고 한쪽 끝에 펜으로 원을 그려 마킹한다.
2. Pipette을 사용하여 DW 1방울을 slide glass 위에 떨어뜨린다.
3. 백금이를 사용하여 plate에서 colony를 따서 증류수와 잘 섞이도록 도말한다.
4. Slide glass를 약간 기울여서 말린다.
5. 건조된 표본을 알코올 램프의 불꽃 위로 2-3회 통과시켜 염색중에 씻겨나가지 않도록 열 고정한다.
6. Gram crystal violet액으로 표본을 충분히 덮을 정도로 염색한다. 1분 후에 뒤집어서 수세한다.
7. Gram iodine액으로 염색한다. 1분 후에 뒤집어서 수세한다.
8. Decolorizer액으로 탈색시킨다. 20-30초 후에 뒤집어서 수세한다.
9. Safranin액으로 염색한다. 20-30초 후에 뒤집어서 수세한다.
10. 공기 중에서 건조시키고 immersion oil을 첨가시켜 현미경에서 관찰한다.

예상결과
김치와 요구르트 속에는 공통적으로 유산균이 들어있는데 이 유산균의 종류에는 젖산간균(Lactobacillus), 써모필러스균(Streptococcus thermophiles), 비피더스균(Bifidobacterium) 등이 있고 이들 모두 그람(Gram) 염색성이 양성이다. 따라서 그람염색을 했을 때, 보라색을 띄는 군집이 보일 것이다.
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