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Fotocolorimetria.

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Ingenieria Biologica

on 17 February 2015

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Transcript of Fotocolorimetria.

¿Qué es fotocolorimetría?
La fotocolorimetría es la medida de la luz absorbida o transmitida por una solución, mediante un instrumento denominado fotocolorímetro. Esta medida permite determinar la concentración de la sustancia en dicha solución. El equipo consta de una fuente de luz artificial, un monocromador, un recipiente o tubo de vidrio (celda), una célula fotoeléctrica que transforma la luz trasmitida en corriente eléctrica y una unidad de medida de la corriente eléctrica o galvanómetro.[2]
Fotocolorimetría.
18 de febrero del 2015
Referencias.
[1].Escuela de química (2015-1). Guía de laboratorio, "Practica N°1. Espectro de absorción y curva de calibración mediante fotocolorimetría". Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín.

[2].Carlos Lavarez. Fotocolorimetría. www.academia.edu/. Disponible en: www.academia.edu/4264776/FOTOCOLORIMETRIA_carlos_lavarez. Consultado el 14 de Febrero del 2015.

[3]. Jony Chong. Espectofotometro. Disponible en: www.youtube.com/watch?v=ILeKva55dWY . Consultado el 13 de Febrero del 2015.

[4]. Liz Reyez. Fotocolorimetria. Disponible en: prezi.com/un9irb5walie/fotocolorimetria/. Consultado el 15 de Febrero del 2015.

[5]. 3.2 Medida de la absorción de radiación o de la Absorbancia. Química analítica. Universidad Nacional Sede Bogotá. Disponible en : www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap09/05_02_01.htm . Consultado el 15 de Febrero del 2015.
Figura 1. Fotocolorímetro.
Absorción de energía por sustancias coloreadas
Al absorber un fotón de energía, el electrón puede ocupar un orbital superior denominado "orbital antienlace".
Figura 2. Espectro electromagnético.
Transición electrónica.
Figura 3. Transiciones electrónicas permitidas.
Ecuación 2. Energía absorbida en la transición.
Cuando se dice que una sustancia absorbe luz de una longitud de onda lambda, significa que sus moléculas absorben fotones de esta longitud de onda.[1]
La intensidad de la energía absorbida por una especie depende del número de moléculas que sufren la transición electrónica a la λ seleccionada, y ese número de moléculas depende a su vez de la concentración de la especie y de la longitud de la celda que la contiene.[1]
LEY DE BEER
Relación 1. Proporcionalidad
Fórmula 4.
Ley de Beer
CURVA DE CALIBRACIÓN
ESPACIO PARA PREGUNTAS Y COMENTARIOS
Para determinar concentraciones desconocidas mas precisas por medio de la ley de Beer, usualmente se prepara una curva de calibración a partir de una series de soluciones patrón, cuyas concentraciones sean próximas a la reales.
Alejandro Arturo Bravo
Laura Melisa Ortiz
(Ingeniería Biológica)

Figura 4. Curva de calibración
Metodología
[3]
APLICACIONES.
1. Identificar compuestos por su espectro de absorción.
2. Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.
3. Seguir el curso de las reacciones químicas y enzimáticas.
4. Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio químico.
5. Análisis cuantitativo de proteínas y determinación de ácidos nucleicos.
6. Cuantificación de macro y micro elementos presentes en el suelo, agua y foliar. [4]
El fotocolorímetro parece estar restringido al uso de sustancias coloreadas, pero el método puede ser usado también en compuestos incoloros si se los hace reaccionar con una especie que genere un producto coloreado.[1]
Absorbancia y Transmitancia.
% T = 100 I / Io; A = log Io/ I = log (100 / %T) = log 100 - log %T = 2 - log %T. [5]
Fórmula 1. Tranmitancia
Fórmula 2. Absorbancia
Desviaciones de la ley de Beer.
Las desviaciones a la Ley de Beer caen en tres categorías: reales, instrumentales y químicas. Dichas desviaciones pueden ser positivas -- si la absorbancia medida es mayor que la real -- o negativas -- si la absorbancia medida es menor que la real -- y llevan a que no se obtengan relaciones lineales entre la absorbancia y la concentración.

OBJETIVOS
Conocer los principios básicos de la fotocolorimetría.
 Determinar el espectro de absorción de un compuesto coloreado.
 Realizar la curva de calibración para una solución de albúmina.
 Determinar concentraciones desconocidas de muestras de proteína.
MATERIALES Y REACTIVOS
Fotocolorímetro, reactivo de Biuret, Solución patrón de albúmina 3 mg/ml (esta debe obtenerse de una solución patrón estándar de albúmina de suero bovino), solución salina al 0.85%, muestras de concentración desconocida.
DETERMINACIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE LA ABÚMINA
PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN DE LA ALBÚMINA
Es necesario agregar reactivo Biuret para que la sustancia este coloreada (absorba y transmita radiación electromagnética en la región visible del espectro) y pueda ser leída por el fotocolorímetro.
Fórmula 5. Aplicación ley de Beer
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