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Listeria monocytogenes

Expo inocuidad
by

Alejandra Calva

on 8 November 2013

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Transcript of Listeria monocytogenes

Calva Escobar Alejandra
Estrada Rodríguez Fernanda
Lara Rosey Enok
Ramírez López Ismael
Inocuidad Alimentaria
3LM4
Listeria monocytogenes
Taxonomía y Descripción
Características
Aislamiento y Cuantificación
Fundamentos de pruebas
Enfermedad
Medidas de prevención
Tratamientos
Bibliografía
- En 1981 Brote por col.

- De 1985 a 1987 hubo 122 enfermos en Suiza

- De 1987 a 1989 Aproximadamente 300 enfermos en UK
Estudio reciente: 95% de los casos esporádicos son ETA
Se ha aislado:
Hortalizas crudas

Leche

QueSos (en especial blandos y curados)

Carne

Productos del mar
Casi todas las cepas de L. monocytogenes parecen ser patógenas aunque el grado de su virulencia, según ha sido determinado en estudios en animales, varía considerablemente.
La listeriosis no invasiva (conocida como gastroenteritis febril por listerias) se ha observado principalmente en algunas epidemias en las que la mayoría de los casos presentó síntomas de gastroenteritis, como diarrea, fiebre, cefalea y mialgia, tras un período de incubación corto
Listeriosis invasiva: cuando el microorganismo penetra el revestimiento interno del tubo digestivo y produce infecciones en puntos normalmente estériles dentro del cuerpo.
Endocarditis
Meningitis
Neumonía
Septicemia
Encefalitis

Abscesos
Conjuntivitis
Gastroenteritis
Lesión cutánea
-Puede provocar un aborto espontáneo

-Muerte del bebé al cabo de unas pocas horas de nacido.
Personas en riesgo
-Adultos mayores.

-Mujeres embarazadas

-Con VIH

-En terapia inmunosupresora

-Con cáncer

-Con transplantes
En los adultos dependiendo de qué órgano o sistemas de órganos estén infectados:
Inflamación del revestimiento interno de las cámaras y válvulas cardíacas
*Se han desarrollado y evaluado relaciones entre dosis y respuesta.
Pruebas y examen
Se pueden hacer exámenes de laboratorio para detectar la bacteria en el líquido amniótico, la sangre, las heces y la orina. Igualmente, se puede realizar un cultivo de LCR.
Se recetan
antibióticos
Trimetoprim
Ampicilina
Sulfametoxazol
Factores clave que incrementan el riesgo
• La cantidad y la frecuencia del consumo de un alimento
• La frecuencia y el grado de contaminación de un alimento con L. monocytogenes
• La capacidad del alimento de favorecer la proliferación de L. monocytogenes
• La temperatura de almacenamiento de los alimentos en frío o en refrigeración siempre <6°C
• La duración del almacenamiento de los alimentos en frío o en refrigeración
Depende:
+ Las medidas tomadas durante la producción primaria, la elaboración, y la distribución.

+ La conservación de la cadena del frío

+ Limitación de duración del almacenamiento refrigerado.
Inocuidad del producto
"Directrices sobre la aplicación de principios generales de higiene de los alimentos para el control de Listeria Monocytogenes en los alimentos". 2009. CAC/GL 61-2007 CCFH (Codex Committee on Food Hygiene)
Dominio: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Listeriaceae
Género: Listeria
Especie: L. monocytogenes
Nombre binomial: Listeria monocytogenes
Bacilo corto (10 μm)
Aislado en cadenas cortas
No esporulado
No capsulado
Anaerobio facultativo
Colonias gris azulado, cambia a azul-verde cuando se observa con luz oblicua .
Morfología
L. inocua
L. murrayi
L. seeligeri
L. welshimeri
L. ivanovii
L. monocytogenes
13 serovariedades, solo tres (4b y 1/2a, 1/2b) producen el 95% de los casos de infección.
Especies de Listeria
Los alimentos son el vector principal
de la infección
humana
con
Listeria
Transmisibilidad
Medios de cultivo:
Caldo Faser semi (FS).
Caldo Fraser completo (FC).
Agar OXFORD.
Agar PALCAM.
Agar triptona de soja-extracto de levadura (TSYEA)
Agar sangre (SA).
Caldo pára la utilización de glúcidos (ramnosa y xilosa).
Agar movilidad (AM).
Identificación
Reactivos:

Solución de peróxido de hidrógeno.

Suplemento para el medio Fraser semi.

Suplemento para el medio Fraser completo.
Confirmación L.monocytogenes
Prueba de inmunoabsorción ligada a enzimas (ELISA)
Sondas de ácido nucleico

Test oxidativo de Listeria

Métodos Alternativos
RapidL´MONOAgar
Medios cromogénicos para Listeria monocytogenes
L. monocytogenes produce
1.-Es importante la limpieza 1 vez por semana con cloro.

2.-No  mezclar alimentos crudos con  cocidos.

3.-Los alimentos cocidos se deben guardar tapados o sellados con egapack.

- En la cocina lavar y desinfectar las superficies y utensilios, luego haber manipulado alimentos crudos.
- Lavar y desinfectar verduras aunque se vendan procesadas.

- Lávese las manos frecuentemente con agua caliente y jabón.

Profilaxis
Pruebas de valor en la diferenciación de especies de Listeria.
“Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio”. Rodríguez Cavallini Evelyn. Editorial Universidad de Costa Rica, pag 243.
HUMEDAD
La mastitis  L. monocytogenes
cuyo caso la leche se utilizará para elaborar quesos a base de leche cruda.

La frecuencia de L. monocytogenes en la leche cruda debido a la alimentación con ensilaje mal fermentado

Producción primaria
Medios de cultivo:
Agua peptona tamponada (APT)
Agar PALCAM
Agar triptona de soja-extracto de levadura (TSYEA)
Agar sangre (AS)
Caldo para la utilización de los glúcidos (ramnosa y xilosa).
Agar movilidad (AM).
Reactivo:
Solución de peróxido de hidrógeno
Recuento de L. monocytogenes
Dr. Artur X. Roig  «Listeria y listeriosis».
Curso de Post-grado en Seguridad Alimentaria
"Métodos de análisis microbiológicos de alimentos" . Allaert Corrie. Editorial Díaz de Santos. España, 2002. Pag 190-195 y 123-124.
Microbiologia M. Prescott, Lansing. 5º Ed
Mc Graw Hill. España 2002. Pag. 1009, 1054 1055
http://www.ictsl.net/downloads/microbiologia.pdf#page=386
http:// www.apastyle.org/elecref.html
Medline Plus (2012). Listeriosis [en línea]. Estados
Unidos. Recuperado el 13 de septiembre de 2012, de
http://www.apastyle.org/elecref.html
FAO (2004) Evaluación de riesgos de Listeria monocytogenes en alimentos listos para el consumo
[en línea]. Roma, Italia. Recuperado el 13 de septiembre de 2012, de
-Catalasa Positivos

-Borde Circular

-Elevación Concava
-Gram +

-Asporógenos

-Ocasionalmente toman forma cocoide o células aisladas de 10µm de longitud
Características Taxonómicas.
Fermentación de azucares y formación de gas, Fenómeno Christie, Atkins, Munch-Petersen y Acción β-Hemolítica en agar sangre.
Especies de Listeria y
sus diferencias.

Crece entre 0°C a 45°C

Muere a temperaturas >50°C

Resistencia a la irradiación gamma similar a otras bacterias vegetativas Gram-positivas (ICMSF, 1980) de 0.34-0.5 KGy

Crecimiento óptimo con una actividad de agua >0.97 aunque puede llegar a tener crecimiento con una Aw de 0.90 a 30°C

Intervalo de pH de 4.6 a 9.2
* Su desinfección es eficaz a concentraciones de 200ppm de cloro para hortalizas

* Inhibición por ácidos.

* Tiene una gran tolerancia a concentración de sal.

* En condiciones aeróbicas, microaerofilicas y anaerobias se observan tiempos de generación parecidos
1
Identificación:
LMP.- Luz a 45º colonias color blanco o azul.
OXA.- Colonias negras con halo negro
Incubar LMP a 30ºC por 24 a 48h y OXA 35ºC mismo tiempo
Resiembra en Medio de cloruro de litio feniletanol-moxolactam (LMP) y Medio base Oxford (OXA)
Aislamiento:
Incubar 48h a 30º C
Homogenizar
225 ml de Caldo EB
25 ml o g
Enriquecimiento:
Preparación de la muestra, NOM-110-SSA1-1994
1 Norma Oficial Mexicana NOM-143-SSA1-1995, Bienes y servicios. Método de prueba microbiológico para alimentos. Determinación de Listeria monocytogenes. Secretaria de Salud. México 1997.
Determinación de Listeria monocytogenes.
Hasta este punto se reconoce a Listeria ssp.
Identificación:
Bacilos cortos con movilidad rotatoria
Observar con objetivo de inmersión
Realizar preparación en fresco de las colonias sospechosas en solución salina al 0,85%
Prueba de movilidad en fresco:
Incubar 35ºC por 24h
Seleccionar 5 colonias resembrar en Agar soya tripticaseína (ASTEL)
1
La Listeria se presenta como bacilo corto Gram positivo
Realizar tinción Gram de cultivos con antigüedad de entre 16 y 24h
Tinción Gram:
Identificación:
+ Inmediata presencia de burbujas
- Ausencia de burbujas
Emulsificar la muestra de cepa con Peróxido 3%
Tomar una muestra de los cultivos identificados de Listeria
Prueba de catalasa:
Identificación:
+ Coloración roja
- Presencia de coloración roja 1h después de adición de Zinc.
Lectura:
Agregar 0.2ml de reactivo A y 0.2ml de reactivo B.
Incubar 35°C por 5 dias
Inocular tubos de ensaye que contienen caldo nitratos con la cepa de Listeria
Prueba de reducción de nitratos:
L. monocytogenes y L. seeligeri tienen actividad hemolítica presentando una zona clara alrededor de la picadura
Observar reacción hemolítica
Incubar 48h a 35°C
Inocular por picadura
Cuadricular una placa de agar sangre de carnero al 5% en 20 a 25 cuadros
Prueba de Hemolisis:
Identificación:
Prueba + coloración amarilla.
Incubar 7 a 35°C
Inocular tubos de caldo purpura para fermentación de carbohidratos
Prueba de utilización de carbohidratos:
Las especies de Listeria son móviles con crecimiento de paraguas.
Observar crecimiento.
Incubar 7 días a Temperatura ambiente.
Inocular tubos de medio SIM por picadura
Prueba de movilidad:
1
Observar la sinergia entre las hemolisinas de S. aureus, R. equi y Listeria
Incubar de 24 a 48h. A 35°C
Sembrar en líneas perpendiculares las cepas de Listeria sin tocar las otras estrías.
Sembrar una estría de S. aureus y otra de R. equi paralela;
Prueba de Cristie-Atkins-Munch-Peterson (CAMP):
Es una enfermedad infecciosa grave que afecta al hombre cuando consume alimentos contaminados con la bacteria Listeria monocytogenes, que se encuentra con frecuencia en el suelo y en aguas contaminadas .
Listeriosis.
Síntomas
* Fiebre

* Dolor muscular

* En ocasiones nauseas y diarrea
_ En 1985 Por queso estilo mexicano

-Entre mayo y noviembre del 2000 por Faimbre de Pavo
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