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INSEMINACION ARTIFICIALL

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on 20 March 2015

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PRODUCCION AGROPECUARIA 750887

Natalia Tinoco
Claudia Diaz
INSEMINACION ARTIFICIAL
Es todo aquel método de reproducción asistida que consiste en el depósito de espermatozoides de manera no natural en la mujer o hembra mediante instrumental especializado y utilizando técnicas que reemplazan a la copulación, en el útero, en el cérvix o en las trompas de Falopio, con el fin de conseguir un embarazo.
QUE ES?
Para lograr el mejoramiento genético de los rebaños bovinos. Se persigue principalmente el nacimiento de animales de alta productividad en un corto período de tiempo.
PARA QUE?
Durante la década del 70, el descubrimiento de las prostaglandinas y su aplicación para controlar el ciclo estral significaron un gran avance en el control reproductivo de los bovinos. Sin embargo, años más tarde y después de algunas investigaciones, se hicieron evidentes las limitaciones de las prostaglandinas para lograr la eficiente sincronización de los celos.
COMO SE HA DESARROLLADO
En los últimos años, gracias al conocimiento de la fisiología del ciclo estral, así como la incorporación de la ultrasonografía para comprender la dinámica folicular de los bovinos, se han desarrollado tratamientos de sincronización que permiten inseminar artificialmente a las hembras bovinas sin la detección de los celos y que se conocen como protocolos de inseminación artificial a tiempo fijo.
ELEMENTOS UTILIZADOS
BOTAS DE CAUCHO: para evitar humedad en los pies y el posible contagio de enfermedades
DELANTAL: para evitar la humedad y el estiércol que se produce al manipular el recto.
GUANTES DESECHABLES CON MANGA: son de plástico y protegen las manos de cualquier infección.
TERMO DESCONGELADOR: Donde se hecha agua para descongelarla pajilla.
BALDE CON AGUA: se usa para lavar la parte posterior de la vaca y lavarse las manos.
TOALLAS DE PAPEL: se utiliza para secar la vulva de la vaca y para secar las pajillas una vez descongeladas.
PISTOLA PARA INSEMINAR: es metálica se usa para colocar la pajilla cuando la inseminación se hace por este método.
Pajillas, catéter, fundas, pinzas, tijeras o cortador
PRESENTACION DEL SEMEN
Congelado
Refrigerado
En fresco
QUE ES UNA PAJILLA?
Pequeño tubo utilizado en la inseminación para contener el semen que se utilizara en dicho proceso
COMO Y EN DONDE SE ALMACENAN?
COMO IDENTIFICARLAS?
Estas vienen coloreadas según la raza así:
RAZA COLOR
Holstein Verde
Pardo suizo Marrón
Ayrshire Morado
Guernsey Amarillo
Jersey Rojo
Normando Violeta
Aberdeen Angus Anaranjado

Shorthorn lechero Verde amarillento
Hereford Canela
Charolaise Rosado
Shorthorn carne Magenta (rojo – morado)
Cebú Verde Oscuro
Santa Gertrudis Azul

CUAL ES LA CONCENTRACION DE UNA PAJILLA?
De acuerdo con los antecedentes conocidos, la concentración espermática por pajilla, es independiente del diluyente de criopreservación, del volumen de la pajilla o de si el material seminal proviene o no del producto de transferencia embrionaria. El análisis de este parámetro indica un promedio de 24.6 millones por pajilla.
COMO ES UN TERMO Y POR QUE CONSERVA LOS ESPERMATOZOIDES?
Vasija plástica donde se hecha agua para descongelar pajillas; lo conserva a muy bajas temperaturas, del orden de los 196 grados bajo cero que se guardan en el interior de termos con nitrógeno líquido
CUANTO TIEMPO PUEDEN VIVIR LOS ESPERMATOZOIDES CONGELADOS?
El semen es congelado en vapor nitrógeno líquido a una temperatura de 196 grados centígrados. A esta temperatura el metabolismo de los espermatozoides es prácticamente en invernación y los espermatozoides pueden vivir por tiempo indefinido.
QUE CAPACIDAD DE ALMACENAMIENTO TIENE UN TERMO?
Termo para Conservación de Semen × 20 Litros Ref. 101217

Termo para Conservación de Semen ×3 Litros Ref. 10121
200cm
POR QUE UTILIZAR GOBELETS?
Porque el semen depositado en gobelets plásticos sobre racks de metal es de mejor calidad seminal.
proveen protección adecuada durante el almacenamiento y el uso, ya que los dos sistemas de soporte tienen un buen margen de seguridad cuando se los transfiere dentro de los 10 segundos. El soporte de metal de ABS tiene tres ventajas sobre el gobelet plástico.
Se utiliza menos nitrógeno durante la transferencia y recuperación, se eliminan los potenciales errores de manejo porque el semen puede ser colocado en estos soportes antes de congelado y no hay pérdida de semen si el gobelet llegara a volcarse
QUE ES LA LINEA DE ESCARCHA?
La escarcha indica que se ha perdido vacío y que el nitrógeno
líquido se ha evaporado o lo está haciendo rápidamente
SE PUEDEN IDENTIFICAR LAS CANASTILLAS?
En la canastilla se encuentra las ampolletas y para identificarlas estas vienen coloreadas según la raza. Entonces no hay la necesidad.
CADA CUANTO SE DEBE RECARGAR EL TERMO CON NITROGENO?
Los termos se debe recargar cuando tienen 30% de su capacidad de nitrógeno. Para la revisión del nivel se utiliza una regla que viene con el equipo, la cual se introduce durante 20 segundos; después se retira y se espera a que aparezca la marca blanca del nitrógeno.
COMO DESCONGELAR LAS PAJILLAS?
COMO DESCONGELAR LOS PELLETS?
COMO SE DESCONGELA Y SE VUELVE A CONGELAR LA PAJILLA?
• Saque la canastilla de su posición y levántelo hasta que la
parte superior de las cañuelas esté a dos o tres pulgadas de
la boca del termo. Evite levantar las pajillas sobre la línea de
congelamiento.
• Ubique la cañuela deseada. A las cañuelas nuevas se les debe
doblar la lámina de identificación en un ángulo de 45º
• Use las pinzas para sacar una pajilla a la vez de la copita
superior. Si se tardara más de 10 segundos para sacar la
pajilla, vuelva a sumergir la cañuela y déjelo por un mínimo
de 30 segundos antes de volver a levantarlo.
• Una vez fuera del termo, agite la pajilla suavemente para
quitar el exceso de nitrógeno líquido del tapón de algodón y
sumérjalo rápidamente en agua a 95º F (35º C) por un mínimo
de 45 segundos.
• Por regla general, solo se deben descongelar las pajillas que
pueden ser usadas en diez a quince minutos. Si se
presentaran problemas, un intervalo de 15 a 20 minutos
entre el descongelamiento y la inseminación no reducirá
significativamente la calidad del semen. Pero, es indispensable que se mantenga la temperatura de la pajilla
cerca de 95º F (35º C) durante todo este tiempo.
• Después de haber usado todas las pajillas de la copita
superior, ésta se debe sacar y descartar.
• Para sacar pajillas de la copita inferior, levante la cañuela
hasta que las pajillas estén a la misma altura de las otras
pajillas. Sostenga la canastilla y la cañuela con una mano.
Con las pinzas en la otra mano, saque la pajilla deseada y
póngalo en el termo descongelador.
• Cuando se hayan usado todas las pajillas de la copita inferior,
saque y descarte la cañuela y la copita.
• Asegúrese de bajar cuidadosamente las cañuelas de semen al
fondo de la canastilla para así evitar dejarlas caer al fondo
del termo.
• Regrese la canastilla a su lugar inmediatamente después de
sacar las pajillas.
QUE ES Y COMO FUNCIONA UN IMPULSADOR?
QUE DIFERENCIA HAY ENTRE FUNDA Y CATETER?
CUANDO SERVIR UNA VACA?
De manera de maximizar la vida productiva, una vaca debe ser servida entre los 80 y 90 días luego del parto. Esto le permite producir un nuevo ternero cada 12,5 a 12,8 meses. Intervalos entre partos más largos poseen un efecto negativo en la vida productiva de la vaca.
Las fundas se utilizan para la pistola de inseminación (o pipeta) fija o universal. Existen fundas verdes para la aplicación de las pajillas y fundas azules para la aplicación de las ampolletas. Mientras que el catéter se utiliza para transferir el semen al útero una vez inseminada.
Pequeño pulsador que funciona por medio de baterías, acumuladores y energia solar.

INSEMINACION ARTIFICIAL
Las pajillas con semen se almacenan en recipientes criogénicos.

Con un baño de mari a una temperatura de 36 a 37 grados aproximadamente.
El semen obtenido fue evaluado y diluido (1:4) en una solución de 5,5% glucosa, 12% yema de huevo y 10% dimetil sulfóxido, empacado en pajillas de 0,5, 1,8, 2,5 o 4,0 mi y congelado en vapores de nitrógeno. La descongelación fue realizada en baño de agua a 35°C, 60°C u 80°C durante diferentes tiempos. Todas las pajillas mostraron una tasa total de congelación similar (entre 7,5 a 12,9°C min-1). A medida que se utilizó una mayor temperatura, la tasa total de descongelación aumentó. Las pajillas de 4,0 mi descongeladas a 35°C tuvieron la mayor movilidad y tiempo de activación posdescongelación (47,0 ± 1,6% y 60,2 ± 2,4 seg).
La fertilidad obtenida con semen congelado en todos los volúmenes de empaque fue significativamente menor (P < 0,05) cuando comparada con semen fresco (65 ± 4%). La mayor fertilidad se observó con pajillas de 0,5 mi, descongeladas a 35°C (52 ± 3%), seguida por las pajillas de 2,5, 4,0 y 1,8 mi (51 ± 3, 48 ± 3 y 47 ± 3%, respectivamente) descongeladas a igual temperatura. En conclusión, pajillas de 4,0 mi, descongeladas a 35°C, mostraron las mejores características postdescongelación y tasas de congelación-descongelación más homogéneas, comparado con los otros empaques. Por su parte, la fertilidad no fue afectada por el volumen de empaque cuando se utilizaron 35°C como temperatura de descongelación.
CADA CUANTOS DIAS SE PRESENTA EL CELO
Las vacas son hembras poliestricas típicas, es decir, presentan su ciclo estral durante todo el año. El ciclo estral de las vacas se repite cada 21 días.
Como se androgeniza una vaca?
Aplicar 1g de enantato de testosterona más 6 g de cipionato de estradiol por dos ocasiones con un lapso de ocho días entre aplicaciones, esto por vía intramuscular.
Aplicar 500 mg de enantato de testosterona cada 15 días por vía intramuscular.
Con este esquema de aplicación de hormona, se inducen animales androgenizados que detectan animales en celo, con la seguridad de que no habrá montas accidentales como sucede con machos con el pene desviado o la posible transmisión de enfermedades venéreas de animales vasectomizados.
Para androgenizar vacas, se sugiere utilizar animales de 3 años en promedio, que tengan buena talla y que sean dominantes en el hato; se pueden utilizar animales con problemas para gestar. Las vacas androgenizadas se deben separar del hato una vez terminada la labor de detección de celos.
Se debe tener en consideración que la vaca androgenizada no sustituye al vaquero en su totalidad, ya que la vaca androgenizada, solo detecta animales en celo, y la persona encargada, debe de estar pendiente para registrar la identificación de las vacas a inseminar.
Detección del celo
Su detección se debe realizar 3 veces al dia mañana , tarde y noche ,periodos de 20 minutos, La detección del estro en las vacas representa un problema, ya que su duración es muy corta, por lo que se hace necesaria la observación visual frecuente para poder detectar lo más eficientemente posible los signos más comunes del estro (fase pre receptiva y receptiva). Se recomienda revisar cuando menos 30 minutos por la mañana (entre 04:00 y 06:00 horas, o bien tan pronto salga el sol) y 30 minutos por la tarde (entre 17:00 y 19:00 horas, o bien al ocultarse el sol), bajo este sistema se pueden detectar alrededor del 70% de las vacas en estro.
Las técnicas para la detección del estro son :
1) los podómetros se mide la actividad física Toros con desviación de pene
2) Toros con fijación de pene a la pared abdominal
3) Toros vasectomizados
4) Toros con estrechamiento de la desembocadura Vacas androgenizadas.
Otro método con el uso de de las vacas
Se puede inducir el celo?
es posible inducir el estro y la ovulación en vacas en anestro y sincronizarlas de acuerdo con los celos de otras vacas de su rodeo, inseminando en períodos fijos, sin detección de celo y con niveles de preñez superiores al 50%.
Es preciso mencionan que para obtener buenos resultados en la lA, es necesario considerar el inicio del celo ya que generalmente esta se realiza entre las 8 y las 24 horas después de iniciado el celo, pero el mejor momento se encuentra entre las 12 y las 16 horas. Inseminaciones realizadas antes o después de este tiempo dan como resultado un porcentaje más bajo de fertilidad se encuentra entre las 12 y las 16 horas.
Cual es el momento optimo para inseminar
Detectar el tiempo preciso del inicio del estro, pues el momento optimo de la inseminación es entre las 12 y 18 horas de los signos externos del celo, Los espermatozoides después de ser depositados en el aparato reproductivo de la vaca, demoran unas seis horas para adquirir la habilidad de fecundar el óvulo. Por lo tanto, la inseminación debe realizarse durante la segunda mitad del celo, es decir, que las hembras reconocidas en celo por la mañana serán inseminadas por la tarde del mismo día, y aquellas que presentan el celo por la tarde se inseminan durante las primeras horas de la mañana siguiente.
Que ayuda se puede obtener
Parches / Etiquetas detectoras de monta
• Ampollas adheridas a la grupa
• Pintura / Tiza / Crayón
• Detectores electrónicos
• Medidores de Pasos
• Animales Alterados
• Cuadro con posibles celos
• Videos
ENQUE PUNTO DEL TRACTO REPRODUCTIVO SE PUEDE COLOCAR EL SEMEN EN UNA I.A
En los bovinos la técnica más difundida y eficaz es el método recto cervical que consiste en introducir un brazo por el recto del animal y con la mano manipular el cérvix y con la otra mano manipula el aplicador o pistola de inseminación que se introduce a través de la vagina y el cuello uterino para depositar el semen en el punto blanco el cual es la unión entre el cuello uterino o cérvix y el cuerpo del útero.
Cual es el tiempo máximo para inseminar después de descongelar la pajilla
una pajilla tiene un tiempo máximo de uso de 10 minutos una vez descongelada (mientras siga en el agua a la temperatura adecuada), la pajilla que exceda este tiempo ya no deberá usarse.
Porque no se presentan los celos
Si no se repite el celo 21 días después del servicio (monta o inseminación) puede presumirse que la vaca esta preñada.
La vaca ha parido y el ciclo estral no se ha reestablecido (celo mudo).
La vaca está en anestro por una mala nutrición, severa infección del tracto reproductivo, u otras complicaciones luego del parto.
La vaca posee un ovario quístico.
El productor falla en detectar una vaca que ha entrado en celo.
Diagnostico de gestación
A partir de los 30-35 días
30 días: vemos una dilatación no eco génica en todo el útero, la vesícula embrionaria ha crecido y dilata el cuerno.
El embrión crece 1,1 cm por día , al día 60 tiene 5-6 cm de largo.
Que ocurre si el semen se coloca en el cuello uterino en la I.A
SI EL SEMEN ES COLOCADO EN EL CUELLO UTERINO O CÉRVIX, SERÁ MENOS LAS POSIBILIDADES DE PREÑEZ YA QUE CON EL USO DE UNA PAJILLA EL NUMERO DE ESPERMATOZOIDES ES BAJO, Y SE PERDERÍAN MUCHOS HASTA LLEGAR AL PUNTO DE FERTILIZACIÓN SIN CONTAR CON LOS QUE SE PIERDEN EN LA VAGINA, HAY QUE TENER EN CUENTA QUE SI EL SEMEN ES DEPOSITADO EN EL PRIMER ANILLO MENOS SERÁN LAS POSIBILIDADES DE PREÑEZ, AL CONTRARIO SI SE DEJA EN EL TERCER ANILLO LOS PORCENTAJES DE PREÑEZ SERÁN MAS ELEVADOS PERO LOS PORCENTAJES SEGUIRÁN SIENDO BAJOS AL DEPOSITARLO EN EL CÉRVIX.
que ocurre al examinar vacas con menos de 45 días de servidas?
Ocurre que la revisión estratégica del no retorno al celo en vacas servidas entre los 35 y 40 días cuando se conocen las fechas de servicios, ya sea por monta natural o por inseminación artificial, en esta etapa, si la gestación es positiva hay estructuras ováricas, contenido y consistencia uterinas que dan información para diagnosticar la preñez, o por el contrario la vacuidad si hubo fallas en la fertilización, transporte, implantación o integridad del embrión, se encuentra el útero tónico, simétrico, sin contenido y posiblemente se pueda detectar en los ovarios algunas estructuras que indiquen que la vaca esta próxima a ovular y programar el servicio nuevamente. De esta forma se evita la perdida de tiempo ya que si se palpa después de los 45 días de servida y resulta vacía ya se han pasado 2 calores y toca esperar el tercero, lo que representa mas de dos meses de tiempo perdido.
Que indicadores se deben evaluar en un programa de I.A
METODOS DE EVALUACION

a) Porcentaje de preñez
Este indicador se calcula sobre el número de animales ofrecidos o aptos y toma en cuenta todos los animales en condiciones de recibir servicios. Lleva implícito varios factores, como la detección de celos (exactitud de la detección y cantidad de celos detectados); técnico inseminador y fertilidad del semen. Un objetivo a alcanzar podría situarse en el 90% de preñez.

b) Intervalo parto - concepción
Este indicador considera los animales que han concebido. Un buen objetivo a lograr sería esperar 90 días de entre el parto y la concepción

c) Servicios por vaca preñada
Total de servicios de animales que han concebido. Una buena meta es tratar de lograr 1.8 servicios por preñez.

d) Porcentaje de abortos
Diferencia entre animales preñados y animales paridos sobre total de animales preñados. Un buen objetivo es que este índice sea inferior a 6%. Es importante precisar en que momentos se producen los abortos.
Existen indicadores que deben ser evaluados a través de un trabajo de asistencia técnica permanente. Establecer una metodología de análisis que lleve a precisar la causa del problema, cuantificarla y plantear medidas para solucionarlas. Los indicadores descritos anteriormente son resultado del pasado, cuanto más largo sea el período considerado más tardan las medidas a aplicar para variar los resultados. En cambio los indicadores de seguimiento pretenden evaluar el comportamiento reproductivo sobre la marcha.
INDICADORES DE SEGUIMIENTO

a) Eficiencia de detección de celos
Se puede usar tres posibilidades:
• Porcentaje de celos de los animales aptos, ciclando en los últimos 25 días; debiera ser superior al 75%.
• Porcentaje de vacas vacías al diagnóstico de gestación sobre el total de vacas revisadas; tendría que ser inferior al 10%.
• Frecuencia de ciclos normales. El 80% de las vacas aptas ciclando tendría que estar entre 17 y 25 días de diferencia entre celos.
b) Índice de preñez
Este indicador mide cuántos servicios resultaron positivos referidos a todos los servicios efectuados en un período determinado; un objetivo alcanzable sería superar el 55%. Este indicador depende de:
• los celos previos que el animal haya presentado (cuánto más celos más fertilidad),
• los días que hubieran pasado luego del parto (a los 70-80 días del posparto se alcanza la mayor fertilidad),
• la estación del año que se considere, es sabido que en los meses cálidos la fertilidad baja,
• la evolución de la condición corporal (una pérdida de condición corporal disminuye la fertilidad).
c) Eficiencia de los técnicos inseminadores
Para evaluar la eficiencia de técnicos inseminadores se deben considerar las mismas condiciones de animales, semen y detección de celos. Un número adecuado para comparar eficiencia es tomar 30 servicios por técnico.

d) Fertilidad de los toros o semen
Se evalúan también en las mismas condiciones de animales, técnico inseminador y detección de celos. Un número significativo de servicios para comparar fertilidad podría ser 30 servicios por toro.
Cabe acotar que estos indicadores de seguimiento indican tendencias, que nos sirven como adelanto para poder tomar medidas a los efectos de mejorar los resultados.
Los verdaderos indicadores son los que enumeramos en el numeral D, pero nos brindan menos posibilidades de corrección en el corto plazo.
Que hacer con las vacas servidas?
las vacas servidas y/o confirmadas preñadas se deben seguir observando para garantizar el no retorno al celo al menos hasta la mitad de la gestación (4-5 meses), se entran a revisión (palpación) las vacas sospechosas de fracaso (delgadas, sucias, con flujos, con signos de calor, etc.) y se sale de la duda dándole el manejo requerido para que no afecten la productividad del lote y la finca por mas tiempo
Cuantas inseminaciones se le pueden hacer a una vaca?
COMO SE HA DICHO ANTES EL CICLO ESTRAL DE LA VACA DURA 21 DÍAS, EL CELO SOLO DURA 24 A 30 HORAS, EL MOMENTO OPORTUNO DE INSEMINACIÓN ES DE 6 A 18 HORAS SIENDO LA HORA 12 PERFECTA PARA LA INSEMINACIÓN, EN ESTE CASO SOLO SE INSEMINA UNA VEZ, OTRA FORMA PARA MAYOR FERTILIDAD, ES INSEMINAR A LA 6 U 8 HORA, POR LA MAÑANA, Y OTRA A LA 16 O 18 HORA, POR LA TARDE, EN ESTE CASO SE INSEMINA SOLO DOS VECES, EN CASO TAL DE NO QUEDAR PREÑADA, SE DEBERÁ ESPERAR EL PRÓXIMO CELO, ES ASÍ QUE LAS INSEMINACIONES QUE SE LE HACEN A UNA VACA SON DOS POR CELO, AUNQUE ESTO TAMBIÉN DEPENDERÁ DEL DUEÑO DEL ANIMAL, SI QUIERE MAYOR PORCENTAJE EN CUANTO A PREÑEZ SE PUEDEN HACER MAS DE 3 A 4, EN EL MISMO TIEMPO.
De donde sale el nitrógeno liquido
Se obtiene de la atmósfera haciendo pasar aire por cobre o hierro calientes; el oxígeno se separa del aire dejando el nitrógeno mezclado con gases inertes. El nitrógeno puro se obtiene por destilación fraccionada del aire líquido. Al tener el nitrógeno líquido un punto de ebullición más bajo que el oxígeno líquido, el nitrógeno se destila primero, momento en que puede separarse.
Precauciones que debe tener el operario
Conservar el termo en lugares ventilados
Recordar que los vapores de nitrogeno disminuyen el oxigeno del aire o ambiente
Mantener el tapon del termo limpio y seco para evitar la formacion de escarcha que impide la salida de vapores
Al transportar un termo dejar abiertas las ventanas del carro
Al destapar el termo evitar que los vapores nos lleguen a la cara
No golpear el termo porque se puede romper
Utilizar guantes y anteojos para manipular el nitrogeno
Con cuantas vacas iniciar un programa de inseminación artificial
Depende el lugar donde se vaya a iniciar el programa ya que en algunos casos no se cuenta con suficientes recursos, en caso de una finca se puede iniciar con 40 o 50 animales, esta debe contar con las siguientes condiciones:

El ganado debe estar totalmente identificado para disponer de buenos registros de producción y reproducción.

La finca debe disponer de instalaciones funcionales, corrales y bretes, para facilitar el manejo de los animales sometidos al programa.

División apropiada de potreros que permita tener una adecuada subdivisión del rebaño en: vacas preñadas, vacas lactantes, vacas no lactantes, vacías y novillas de reemplazo.

Los animales en pastoreo deben tener disponibilidad y calidad de forraje que satisfaga sus requerimientos nutricionales y en aquellas zonas donde existen períodos de sequía, es necesario la suplementación alimenticia.

Suministro apropiado de sal y minerales para garantizar un buen porcentaje de preñez.

Personal capacitado para todas las labores que el programa requiere, tales como: prácticos inseminadores, obreros adiestrados en la observación y detección del celo. Este personal debe ser supervisado por el Médico Veterinario, quien planifica y coordina el programa de inseminación artificial
Porcentaje de fertilidad
La fertilidad que reportaron fue de 62.9% y 62% .Estos resultados son superiores a los nuestros lo que posiblemente se deba a que las vacas Bos Taurus, tienen mejores tasas de concepción que las vacas Bos indicus aún bajo las mismas condiciones de crianza. Además las vacas del presente estudio permanecieron todo el tiempo con sus crías. Existen evidencias de que las vacas con estímulos frecuentes de amamantamiento presentan períodos más prolongados de anestro y bajos porcentajes de concepción.
Normas higiénicas
Botas de caucho
Delantal
Guantes
Toallas de papel
Balde con agua
Lavar la parte posterior de la vaca sin usar jabones ni desinfectantes.
Untar el guante con aceite vegetal o agua
Como y cada cuanto medir el nivel de nitrógeno en los termos
El nitrógeno no debe estar por debajo de 10cm desde el fondo, para medirlo se introduce una varilla de madera o plástico negra (nunca hueca) dejarla en posición vertical por unos 5 o 10 segundos, secarla y agitar al aire. La zona de color blanco donde se condensa el vapor de agua atmosférico indica la medida del nitrógeno existente en el termo.
Para la congelación, las pajillas fueron distribuidas aleatoriamente en un soporte de polímero de PVC, diseñado para mantenerlas en posición vertical y lograr una congelación homogénea, el cual fue inmediatamente introducido en un termo de vapores de nitrógeno durante 30 min. Finalmente, todas las pajillas fueron trasladadas a un termo de almacenamiento, sumergiéndolas directamente en nitrógeno líquido (NL) a -196°C hasta la realización de los experimentos. Este procedimiento fue repetido cinco veces, empleando machos diferentes en cada uno de ellos.
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