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FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM

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Luis Arredondo Patiño

on 17 February 2016

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Transcript of FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM

Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las Gram positivas.

la menor cantidad de mucopéptido de las paredes de las bacterias Gram negativas.

DIFERENCIA DE COLOR
cantidades de etanol a las células teñidas con cristal violeta.
El citoplasma de las células que han perdido el cristal violeta se tiñen con otro colorante (safranina). La diferencia de color se relaciona con el tipo de pared bacteriano:
células de color violeta (bacterias de pared Gram positivas)
células de color rosa (bacterias de pared Gram negativa).

Fundamento
COLORANTES
Cristal violeta
El cristal violeta es básico (se une a componentes celulares de carga negativa). Atraviesa la PARED celular y se acumula en el citoplasma.

La pared de Gram negativas debe su rigidez a una capa de mureína mas delgada, a través de la cual el alcohol extrae el cristal violeta  de estas células.

Cuando se añade etanol a una mezcla de células Gram positivas y Gram negativas teñidas con cristal violeta, las células Gram positivas quedan teñidas de violeta.

DECOLORACION
FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM
El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula.

bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844.

Tincion diferencial
DIFERENCIACION
todas las células sin pared (como las animales) pierden fácilmente el cristal violeta (se verán de color rosa).
Todas las células con pared gruesa (como las de hongos) se verán de color violeta.
La correlación entre el color y el tipo de pared solo tiene sentido con células bacterianas.

1. CRISTAL VIOLETA
2. LUGOL
3. ALCOHOL ACETONA
4. SAFRANINA

Los colorantes se estandarizan en tiempo
1-E-1-E-15-E-30

Para facilitar la diferenciación se mezcla lugol con cristal violeta: el complejo cristal-violeta-lugol precipita. Así el lugol dificulta la salida del cristal violeta de ambos tipos de células, pero es más fácil de extraerlo de las Gram negativas que de las Gram positivas.

Su citoplasma queda incoloro y puede teñirse de color rosa con el colorante de contraste: la safranina.
Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras.

La edad
Las condiciones del cultivo
La actividad de las autolisinas
Las células envejecidas, o crecidas en condiciones que impiden la síntesis de mucopéptido
La intensidad de la decoloración con alcohol

FACTORES QUE AFECTAN EL RESULTADO DE LA COLORACION
La edad
Las condiciones del cultivo
La actividad de las autolisinas
Las células envejecidas, o crecidas en condiciones que impiden la síntesis de mucopéptido
La intensidad de la decoloración con alcohol

DIFERENCIAS
entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración.
bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula
La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la célula se decolora.

Las células grampositivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular.

Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica.

GRACIAS
Luis Miguel Arredondo Patiño.
Bacteriologo Esp. 2016
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