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TESIS CROTON LECHLERI

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adriana castillo

on 22 May 2013

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Transcript of TESIS CROTON LECHLERI

photo credit Nasa / Goddard Space Flight Center / Reto Stöckli Úlceras cutáneas PREGUNTA PROBLEMA: ¿ inhibe los agentes bacterianos que se asocian a las úlceras cutáneas sobreinfectadas?
La exploración científica multidisciplinaria de los agentes biológicamente activos de elementos de la naturaleza empleados u observados tradicionalmente por el hombre (Castillo 2007) ETNOFARMACOLOGÍA Aplicación en diversos campos como:
Dermatología, Inmunología, Virología, Parasitología, Bacteriología, entre otras. (Cowan 2007) Tratamientos
prolongados, lo que con
lleva a la interrupcion del tratamiento

surgimiento de bacterias
multirresistentes. USO DE LA ETNOFARMACOLOGÌA VS FARMACOS SINTÉTICOS PROPIEDADES FARMACOLÓGICAS Estimula la contracción de la herida
Formación de colágeno
Quimiotaxis de fibroblastos Mezclado con óxido de zinc
(Cortés, 2005) ANTIBACTERIANA ANTIVIRAL ANTIPARASITARIA INMUNOMODULADORA ANTIINFLAMATORIA ANTICANCERIGENA CONCLUSIONES presentó actividad antibacteriana frente a las cepas aisladas de úlceras cutáneas sobreinfectadas de los pacientes en estudio. El extracto etanólico tiene un mayor potencial antibacterial frente a las bacterias del estudio en comparación con el del extracto obtenido con éter de petróleo; gracias a su afinidad polar y su variedad de componentes, presentando en el estudio halos de inhibición de gran significancia El ensayo que mostró una mayor sensibilidad y reproducibilidad fue el de difusión en pozo, en comparación con el ensayo de disfusión en disco que mostro una marcada reducción en los halos de inhibición fue la bacteria que presentó la menor sensibilidad frente a los extractos de y la mayor sensibilidad fue presentada por BIBLIOGRAFÍA GRACIAS Potencial Antibacterial de los extractos de Ensayo de Difusión en Pozo Ensayo de Difusión en Disco Ensayo de Dilución en Agar. O
EVALUACIÓN DEL POTENCIAL ANTIBACTERIAL IN VITRO DE FRENTE A AISLAMIENTOS BACTERIANOS DE PACIENTES CON ULCERAS CUTÁNEAS ADRIANA CATHERINE CASTILLO CASTAÑEDA
ANDREA KATERINE MELO VARGAS


Asesor: MSc. LUCIA CONSTANZA CORRALES RAMÍREZ








UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO
BOGOTÁ, MAYO DE 2013 -TASPINA
-POLIFENOLES
(Jones, 2003) (Votano, 2004) Tratamiento de Alveolitis Necrosante Virus Herpes ( Tipo I y II)
Virus de la Hepatitis (A y B)
Virus de la Influenza A (FLU-A)
Virus de la Parainfluenza (PIV)
Virus Sincitial Respiratorio (RSV)
Estudios contra el HIV
SP-303

(Gupta, 2008) (Jones, 2003) SP-303 proantocianidina
Ácido clorequínico
Coberinas A y B Proadyuvante en el tratamiento
de enfermedades autoinmunes Inhibidora de las vías clásica y alternativa del sistema del complemento

Inhibe la proliferación de células T estimuladas. (Gupta, 2011) Estudiado en enfermedades
como leucemia linfática
crónica

(Cortés 2005) (Votano, 2004) TASPINA Inhibe la inflamación neurogénica, bloqueo directo de la activación de los nervios sensoriales aferentes

(Cortés, 2005) (Votano, 2003) Contra helmintos, nemátodos RESULTADOS Tiene gran impacto en países con economías poco consolidadas
Sistemas de seguridad social no universal o de poca cobertura Costo accesible Efectivos

pocos o nulos efectos adversos Pueden generar
efectos secundarios desfavorables
para la salud. Tratamiento de un gran número de afecciónes causadas por:
agentes microbiológicos
cáncer Familia , conocido también como Sangre de Drago por los pueblos indigenas (Coronel 2009)

Nativo de regiones de la amazonia en Bolivia, Colombia, Ecuador, Perú y Brasil
(Rivera, 2007) (Gupta, 2011) (Jones 2003) Usado por los indígenas en el tratamiento de afecciones como:

• Cáncer,
• Diarrea,
• Enfermedades gastrointestinales,
• Afecciones dérmicas
• Dolor.
(Jones, 2003) (Risco, 2001) Tomado de google imagenes Las Úlceras agudas son de fácil resolución gracias a procesos como:
-Hemostasia
-Inflamación
-Proliferación
-Remodelación Principales Agentes Bacterianos de crecimiento
aeróbico que han sido asociados a las ulceras cutáneas OBJETIVOS es una planta con importantes propiedades antibacterianas, que la hacen candidata para ser usada en la industria farmacéutica alternativa en el mercado actual AGRADECIMIENTOS A las Directivas del Sanatorio de Agua de Dios, quienes nos abrieron las puertas y apoyaron esta investigación al permitirnos trabajar en conjunto con su personal de salud y sus pacientes; quienes son personas maravillosas, ambles y muy gratas para nosotras, en especial la Señora Marina Plata .

A la Dra. Lucia Constanza Corrales Ramírez, quien no solo fue nuestra asesora temática y metodológica; sino que también, fue guía, colaboradora y un gran apoyo no solo en el proceso investigativo sino también en nuestro crecimiento personal.

A las jurados del proyecto, ya que nos apoyaron en este proceso, dando pautas y sugiriendo correcciones para concluir idoneamente este proceso investigativo.

A nuestra alma mater la Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca la cual nos formo como profesionales idóneos e integrales encaminados a el progreso científico, económico, político, cultural y social del país y apoyó económicamente la realización de este proyecto. En especial al personal del Laboratorio Central de la Facultad de Ciencias de la Salud; por la colaboración, comprensión y disponibilidad de recursos.

Al Coordinador de Química de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas, y al licenciado estudiante de postgrado, por sus aportes intelectuales y disponibilidad del equipo para la obtención del extracto de Croton lechleri


A la Dra Marcela Guevara y la Dra Adriana Celis, al proporcionarnos apoyo en la última etapa de la fase experimental del proyecto, no solo brindando apoyo a nivel de instalaciones locativas de la Universisas de los Andes; sino ofreciéndonos consejos y enseñanzas aplicables a esta investigación.

Al señor Herminsul Campuzano Reyes, quien nos presentó a groso modo el área de la Etnofarmacología, poniendo a nuestro servicio sus conocimientos y guiando este estudio hacía el empleo de Croton lechleri, la planta eje de nuestra investigación. Inhibidora in vivo de la toxina del cólera
Las Ùlceras Crónicas representan una interrupción en la continuidad de la piel, que trastornan la estructura anatómica y funcional del tejido, en las que los anteriores procesos bioquímicos se ven alterados por:

- Inflamación no controlada
- la enfermedad de base del paciente
- la sobreinfección de la úlcera (Houngbédji, 2008)
(Barbeito, 2005) Acetites esenciales como timol, carvacol, camfor.
(Votano, 2009) (Zampini , 2007) (Barbieto, 2005 ) (Cortés, 2005)
(Gómez, 2007)
(Castillo, 2007) (Ruíz, 2011)
(Suarez, 2006) (Díaz, 2003) PROPIEDAD
CICATRIZANTE PROPIEDAD
ANTIMICROBIANA OTRAS
PROPIEDADES Se aislaron 7 bacterias de crecimiento aeróbico; de las cuales, un 57.2% son bacterias Gram Positivas y un 42.8% son bacterias Gram Negativas. En el ensayo de DILUCIÓN EN AGAR con el Extracto Etanolico se obtuvo :

-Un 0% de Crecimiento de las Bacterias en la dilucion 1:1
-Un 11.11% de Crecimiento de las Bacterias en la dilución 1:2
-Un 33.33% de Crecimiento de las Baacterias en la dilución 1:4 . evidenció un importante potencial antibacterial al extracto, al presentar los mayores halos de inhibición en las tres diferentes diluciones evaluadas.
En dilución 1:1 = 21.5mm
En dilución 1:2 = 19.5mm
En dilución 1:4 = 17.5mm En contraste, (ATCC) fue la bacteria con los menores halos de inhibición
En dilución 1:1 = 12.5mm
En dilución 1:2 = 9.0mm
En dilución 1:4 = 7.0mm  En el ensayo de DIFUSIÓN EN POZO para el extracto de Éter de Petróleo, se observó que el diámetro de los halos de inhibición presento una disminución.
En dilución 1:1 = 15.0mm
En dilución 1:2 = 13.5mm
En dilución 1:4 = 12.5mm Para el ensayo de DIFUSIÓN EN DISCO con el Extracto de Éter de petróleo, se observó una disminución en el diámetro de los halos de inhibición en comparación con los resultados obtenidos para el ensayo con el extracto etanólico Objetivo General Objetivos Específicos Diseño Metodológico - Tipo de investigación: Descriptiva, prospectivo,

- Población de estudio: Agentes bacterianos de crecimiento aeróbico, aislados de las úlceras cutáneas sobreinfectadas.

- Muestra: Cepas bacterianas de crecimiento aeróbico aisladas de úlceras cutáneas sobreinfectadas en 5 pacientes del Sanatorio de Agua de Dios y cepas ATCC.

- Hipótesis: El extracto de inhibe el crecimiento de agentes bacterianos aeróbicos, aislados de las úlceras cutáneas sobreinfectadas.

- Variables e indicadores

* Dependientes (indicadores): Aislamientos bacterianos obtenidos en los pacientes del estudio.

* Independientes (indirectas): Potencial antibacterial del extracto de . frente a las bacterias aeróbicas aisladas. Estructura del Trabajo fase 2 fase 1 fase 2 fase 3 fase 4 fase 2 fase 3 Ensayos de Sensiblidad Antimicrobiana Ensayos de Sensibilidad Antimicrobiana Dilución en Agar Difusión en Pozo Difusión en Disco Sustrato, extractos etanólico y de éter de petróleo de Preparación del inóculo a escala 0.5 MacFarland, método de suspensión directa de las colonias Preparación de diluciones sucesivas en base 2 de cada uno de los extractos, usando como diluyente el DMSO (1:1, 1:2, 1:4) Inoculación masiva del microorganismo sobre la superfici de agar Mueller Hinton Inoculación masiva del microorganismo sobre la superfici de agar Mueller Hinton Perforación del medio con sabacocados estériles de 6 mm de diametro, 4 pozos por caja Discos de papel filtro (Wescor) impregnados con 20 µL de cada dilución.
incubación 18-24 h a 37°C Depositar 20 µL de la dilución determinada en cada pozo.

pozo a= 1:1 pozo b= 1:2, pozo c= 1:4, pozo d= DMSO (control negativo) Incubados a 37°C durante 18 – 24 horas. Poner cada disco de cada concentración

disco a= 1:1, disco b= 1:2, disco c= 1:4, disco d= DMSO ó Sensidisco AB comercial Incubados a 37°C durante 18 – 24 horas. Lectura de la susceptibilidad antimicrobiana, por observación y medición del halo de inhibición alrededor de cada pozo. Lectura de la susceptibilidad antimicrobiana, por observación y medición del halo de inhibición alrededor de cada disco. Agregar una parte de la dilución del extracto a nueve partes del Agar Mueller Hinton aun en estado líquido. Mezclar Servir en caja petri, Inoculación masiva del microorganismo sobre la superfici de agar Mueller . comenzando por la caja control (caja de Agar Mueller Hinton sin extracto) Incubados a 37°C durante 18 – 24 horas. Lectura de la susceptibilidad antimicrobiana, por observación de crecimiento (UFC) en la superficie del agar o su ausencia Obtencion de los extractos según metodología de:

Bobrowski Paul
Nº US 7280183B2 fase 2 Pruebas de Sensibilidad Antimicrobiana DISCUSIÓN fase 4 Socialización de los resultados obtenidos
ante el Comité de Etica eInvestigaciones
Sanatorio de Agua de Dios E.S.E INTRODUCCIÓN ANTECEDENTES Risco E, Iglesias J 2001 2009 Bobrowski Paul 2007 Panda et al. 2010 Gupta D. 2011 Revisión acerca del interés
terapéutico del látex de Métodos para la obtención del látex y preparación de extractos de las especies de Croton, junto a revisión de actividades del extracto

Patente Nº US 7280183B2 Propiedades Bioprotectivas de la resina de Sangre de Drago, junto con la evaluación de la actividad antioxidante y antimicrobiana Propiedades antimicrobianas
contra enteropatógenos de Metodologías para evaluar in vitro la actividad antibacteriana de compuestos de origen vegetal. Ramírez L. 2013 MARCO TEORICO MARCO LEGAL Y NORMATIVO Houngbédji MG, Boissinot M, Bergeron GM, Frenette J. Subcutaneous injection of Mycobacterium úlcerans causes necrosis, chronic inflammatory response and fibrosis in skeletal muscle. Microb. Infec. 2008;10(12-w13):1236-43

Barbeito S et al. Úlceras crónicas: modelo de integración entre patología vascular, inmunológica e infecciosa. Vitae [en línea], 2011 [en línea], julio-septiembre 2005

Cabrera Y, Fadragas A, Guerrero L. Antibióticos naturales. Mito o realidad. Revista Cubana Medicina General Integral [en línea], 2005 [revisado el 20 de febrero de 2012]; 21 (3-4) . Disponible en: http://bvs.sld.cu/revistas/mgi/vol21_3-4_05/mgi253-405.htm

Cowan M. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology. Reviews, [en línea]. 1999 [revisado el 15 de Noviembre de 2012], 12(4):564. Disponible en: http://cmr.asm.org/content/12/4/564.long

Gómez F, Plantas Medicinales aprobadas en Colombia. Universidad de Antioquia. 2da Edición. 2007

Gupta D. Bioprotective properties of Dragon’s blood resin: In vitro evaluation of antioxidant activity and antimicrobial activity. Complementary and Alternative Medicine 2011, 11:13

Bobrowski P. Methods and preparation of the latex from the Croton species. United States Patent: Patent Nº US 7280183B2. Abril 24 2007
Risco E, Iglesias J. Interés Terapéutico del látex de Croton lechleri. Forum De Natura Rerum.París, 20-21 de Octubre. 2001

Ramírez L. Metodologías para evaluar in vitro la actividad antibacteriana de compuestos de origen vegetal. Scientia et Technica Año XV, No 42, Agosto de 2009. Universidad Tecnológica de Pereira. ISSN 0122-1701

Klancnik et al. Evaluation of diffusion and dilution methods to determine the antibacterial activity of plant extracts. Journal of Microbiology Methods [en línea], 2010. [revisado el 02 de febrero de 2013]. 81(2):121-6. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20171250

Votano J et al. No title. Chemistry & Biodiversity [Internet]. 2004 [cited 2013 Feb 17]; 1: 1829–1841. doi: 10.1002/cbdv.200490137. Disponible en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/cbdv.200490137/abstract

Cortes J. Actividad biológica de extractos de plantas usadas para el tratamiento del cáncer e infecciones en Tepatepec, Hidalgo. Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo. Tesis para obtener el título de Licenciado en Biología [en línea]. 2005 [revisado el 15 de Febrero de 2013]. Disponible en: http://www.uaeh.edu.mx/docencia/Tesis/icbi/licenciatura/documentos/Actividad%20biologica%20de%200extractos.pdf Identificación bacteriana En el ensayo de DILUCIÓN EN AGAR con el Extracto de Eter de petroleo se obtuvo :

- Un 44.4% de Crecimiento de las Bacterias en la dilución 1:1
- Un 100% de Crecimiento de las Bacterias en las diluciones 1:2 y 1:4 El menor diámetro de halos en las tres diferentes diluciones fue presentado por
Dilución 1:1 = 6.0mm
Dilución 1:2 = 6.0mm
dilución 1:4 = 6.0mm ANTIVIRAL ANTIPARASITARIO 1. Protocolos del Clinical Laboratory Standars Institute (CLSI).
A.Protocolo M07-A8 Vol. 29 No. 2
B.Documento M100-S21 del CLSI (volumen 31- N°1) 2. Klancnik et al. en el 2010 afirma que la polaridad es un aspecto importante que permite comprender las diferencias entre la actividad y la eficacia de los extractos de una misma planta. El extracto etanólico de Croton lechleri = Apolar = >Potencial antibacterial
Extracto de éter de petróleo de Croton lecheri =Polar
< Potencial antibacterial Lo que se correlaciona con la diferencia
en los resultados del potencial
antibacteriano obtenidos para cada
uno de los extractos. Los metabolitos secundarios que se obtienen en cada uno de los extractos dependen del solvente usado para su obtención, e influyen sobre la eficacia antibacterina. (Cowan M. 1999 ) El Extracto Etanólico presenta un mayor número de compuestos con actividad antimicrobiana, tales como:
- taninas - alcaloides
- poliacetilenos - terpenoides
- polifenoles
- flavonoles
- esteroides
- propòleos Esto se correlaciona con la disminución del potencial antibacterial del extracto de éter de petróleo. Difusiòn en disco Dependiendo de la técnica escogida variaran los resultados, así como su sensibilidad y reproducibilidad de acuerdo con las características de los extractos Ramírez y colaboradores; y Klancnik
señalan que la técnica de Difusión en
Disco presenta desventajas cuando se
evaluan extractos vegetales que
contengan compuestos catiónicos
y polares Se debe a que el papel filtro de
Whartham está compuesto por celulosa
y una alta cantidad de
grupos hidroxilo libres que le
confieren propiedades hidrofílicas al disco



Afectando directamente algunos
compuestos catiónicos de los productos
naturales.



Los cuales son absorbidos
por la superficie del disco impidiendo su
difusión en el medio. Panda y colaboradores "Al administrar el extracto vegetal en diferentes concentraciones directamente en pozos; el método es más sensible, debido a que el extracto difunde libremente en el agar. Difusiòn en pozo Usados habitualmente Que sigue ... La evidencio halos de:
En dilución 1:1 = 14.5mm
En dilución 1:2 = 13.0mm
En dilución 1:4 = 11.0m (ATCC) evidencio halos de:
En dilución 1:1 = 9.5mm
En dilución 1:2 = 7.0mm
En dilución 1:4 = 6.5mm Estudios donde determinen el potencial antibacterial de cada uno de los componentes activos del extracto de Estudios que determinen las propiedadades antimicóticas de Investigaciones que fundamenten
las propiedades cicatrizantes
del extracto de en úlceras cútaneas crónicas Determinación in vivo del potencial antibacterial del extracto de

en úlceras cutáneas
sobreinfectadas Etiología

Agentes externos: virus, parásitos, hongos, bacterias, traumatismos o presión.

Agentes internos: afecciones de la inmunidad, metabólicas y de vascularización METODOLOGIA El ensayo de DIFUSIÓN EN POZO con Extracto Etanolico se evidencio: Para el ensayo de difusión en disco con extracto etanolico los diámetros de los halos de inhibición fueron: En los ensayos realizados se evidencio una diferencia en el Potencial antibacterial entre el extracto etanòlico y con èter de petròleo. LA POLARIDAD DEBIDO A METABOLITOS SECUNDARIOS El Extracto de Éter de Petroleo la composición de metabolitos secundarios se ve reducido a la mitad, conteniendo:
- alcaloides
- terpenoides
- aceites esenciales
- cumarinas Se presentaron diferencias en los halos de inhibicion entre el ensayo de difusión en pozo y el de difusión en disco, con una marcada disminucion de los halos en el segundo ensayo. www.google.com/imagenes
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