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Aplicaciones de la PCR en análisis de alimentos.

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by

Van MV

on 28 September 2015

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Transcript of Aplicaciones de la PCR en análisis de alimentos.

Principio de la técnica
Consiste una amplificación exponencial de un fragmento del AND, basado en el mecanismo de replicación “in vivo”

el dsDNA es desnaturalizado a ssDNA, este se duplica y el proceso se repite durante el tiempo de reacción.


Antecedentes
1971 : Se describe principio de la PCR (polymerase chain reaction) (Kleppe et al., 1971).

1985: Se publican las primeras pruebas (AND polimerasa termoestable) (Saiki et al., 1985, 1988; Mullis et al., 1986).

Detección molecular de evenos transgénicos en alimentos de consumo masivo
UNA abril 2015
Aplicaciones
Filogenia basada en ADN
Clonación de ADN para secuenciación
Análisis funcional de genes
Diagnóstico de enfermedades genéticas e infecciosas
Identificación de ADN de distintas especies
Detección e identificación de ADN de virus y bacterias
Detección de eventos transgénicos
Aplicaciones de la PCR en análisis de alimentos
Contenido
Generalidades
Equipamiento
Aplicaciones específicas
Equipamiento
Cabinas de trabajo
Fotodocumentador
Espectrofotómetros
Cámaras de electroforesis
Componentes de PCR
Vanny Mora
Natalia Barboza

PCR punto final
Tiempo real
Termocicladores
Otros
Thermus aquaticus
Claudio Martinez Debat, Dr QF
LaTraMA ::: Laboratorio de Trazabilidad Molecular Alimentaria-Uruguay
Detección de soya y maiz
Gen de lecitina: Le1
Gen grupo de proteinas de alta movilidad: HMGA
Identificación de evento específico de Maiz
Evento Mon 810: resistencia a lepidopteros
Screening de OGM
Gen promotor CAMVP 35S
Gen terminador T-Nos
Esquema de analisis de eventos transgenicos
PH
Zar
Krush
C-
Rrsoja
PE
VL
C-
591
PH
Zar
Krush
C-
PE
Zar
35S
T-Nos
Mon
810
HMGA
LE
MPM
50pb
Gracias!

Preguntas?
Gel de agarosa 3%, TBE 1X
Identificación molecular de bacterias u otros microrganismos

Gel de agarosa al 1%. Estandarización del PCR para los iniciadores nisAf1-nisAr2 con las muestras de piña

Figure 1. Molecular identification of nisin coding genes by PCR: nisAf1-nisAr2 (product ~160 bp), M = 100-bp ladder; N = negative control; P = positive control; 01 to 18 = tested cultures

Identificación molecular de genes de importancia: bacteriocinas

Utilidad del PCR en tiempo real (qPCR )

Amplificación Isotérmica

Son plataformas de secuenciación de múltiples secuencias de ADN que se encuentran en este momento disponibles
Son accesibles económicamente
Están disponibles para todos los investigadores.

Secuenciación de nueva generación:

In shotgun sequencing with cyclic-array methods, common adaptors are ligated to fragmented genomic DNA, which is then subjected to one of several protocols that results in an array of millions of spatially immobilized PCR colonies or ‘polonies’15. Each polony consists of many copies of a single shotgun library fragment. As all polonies are tethered to a planar array, a single microliter-scale reagent volume (e.g., for primer hybridization and then for enzymatic extension reactions) can be applied to manipulate all array features in parallel. Similarly, imaging-based detection of fluorescent labels incorporated with each extension can be used to acquire sequencing data on all features in parallel. Successive iterations of enzymatic interrogation and imaging are used to build up a contiguous sequencing read for each array feature. Jay Shendure & Hanlee Ji. 2008. nature biotechnology.

Second-generation DNA sequencing
Full transcript