Loading presentation...

Present Remotely

Send the link below via email or IM

Copy

Present to your audience

Start remote presentation

  • Invited audience members will follow you as you navigate and present
  • People invited to a presentation do not need a Prezi account
  • This link expires 10 minutes after you close the presentation
  • A maximum of 30 users can follow your presentation
  • Learn more about this feature in our knowledge base article

Do you really want to delete this prezi?

Neither you, nor the coeditors you shared it with will be able to recover it again.

DeleteCancel

Make your likes visible on Facebook?

Connect your Facebook account to Prezi and let your likes appear on your timeline.
You can change this under Settings & Account at any time.

No, thanks

SPECTROSCOPY UV-VIS

No description
by

Nanda Suryaning Rohma

on 6 May 2014

Comments (0)

Please log in to add your comment.

Report abuse

Transcript of SPECTROSCOPY UV-VIS

Hukum Lambert - Beer
Panjang Gelombang UV dan Sinar Tampak
Analisis kualitatif dgn metode spektroskopi UV-Vis hanya dipakai untuk data sekunder atau data pendukung. Pd analisis kualitatif dengan metode spektroskopi UV-Vis yang dapat ditentukan ada 2 :

*Pemeriksaan kemurnian spektrum UV-Vis
*Penentuan panjang gelombang maximum

Pada penentuan panjang gelombang maksimum didasarkan atas perhitungan pergeseran panjang gelombang maximum karena adanya penambahan gugus pada sistem kromofor induk.
next..
TEORI
Spektrofotometri UV-Vis adalah teknik analisis spektroskopi yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai instrumen spektrofotometer
PENDAHULUAN
SPECTROSCOPY
UV-VIS




Anggota:

Nanda Suryaning R. 122210101032
Yasmin 122210101034
Mia Riswani 122210101042
Galuh Sinoarsih 122210101050
Vinastika Gita Y. 122210101098
Baiq Wahyudyati K 122210101114

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS JEMBER
Komponen Instrumentasi UV-Vis
Sumber Radiasi (Lampu wolfram)
Kuvet / Sample Container (Kuarsa atau silika)
Monokromator (Prisma kaca atau kuarsa)
Detektor
Pencatat

Sumber cahaya digunakan untuk pengukuran serapan molekul.
Monokromator akan memecah cahaya polikromatis menjadi  cahaya tunggal (monokromatis) sehingga berguna untuk memisahkan spektrum warna sesuai dengan panjang gelombang yang dipilih.

Ada 2 bagian monokromator:
Grating (kisi difraksi): memberi keuntungan lebih bagi proses spektroskopi. Dispersi sinar akan disebarkan merata, dengan pendispersi yang sama, hasil dispersi akan lebih baik.
Prisma: mendispersikan radiasi elektromagnetik sebesar mungkin supaya di dapatkan resolusi yang baik dari radiasi polikromatis.
Komponen Monokromator
Cahaya : - semua cahaya
- cahaya polikromatik
Monokromator : memilih cahaya monokromatik (Cahaya satu warna )

Aplikasi spektrofotometer UV

Protein
Glucose Determination
Enzyme Activity (Hexokinase)
Amino Acids (aromatic)




Aplikasi spektrofotometer visible
Niacin
Pyridoxine
Vitamin B12
Metal Determination (Fe)
Fat-quality Determination (TBA)
Enzyme Activity (glucose oxidase)


Penentuan konsentrasi sampel
Ukur panjang gelombang maks
Buat kurva standar
Ukur sampel
Konversi A sampel dengan kurva standar

SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
APLIKASI
Analisis kuantitatif
Penetapan Fe(II) sebagai kompleks dengan o-fenantrolin (VIS)
Penetapan nitrat dalam makanan daging olahan
Penetapan kafein dalam berbagai kemasan minuman kaleng
Titrasi Fotometri
Mendeteksi titik ekivalen titrasi, dimana analit, pereaksi, atau hasil titrasi mengabsorbsi radiasi


*Hukum Beer menyatakan Jumlah radiasi yang diserap proporsional dengan ketebalan sel ( b ), konsentrasi analit ( c ), dan koefisien absorptivitas molekuler ( a ) dari suatu spesi (senyawa) pada suatu panjang gelombang.

*Hukum Lambert menyatakan proporsi berkas cahaya datang yang diserap oleh suatu bahan/medium tidak bergantung pada intensitas berkas cahaya yang datang.
rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya cahaya yang hamburkan.
Cahaya yang dihamburkan diukur sebagai T, Intensitas cahaya datang (Io) dan Intensitas cahaya setelah melewati sampel (lt).
next ..
Syarat jika harus diukur dengan UV Vis :
1. Mempunyai gugus kromofor, yakni gugus yang menyebabkan seyawa pewarna, gugus yang bertanggung jawab pada absorbsi REM, dan gugus yang berupa ikatan tidak jenuh
2. Konfigurasi elektron berada pada eksitasi terendah


Kuvet
Cuvet spektrofotometer adalah suatu alat yang digunakan sebagai sampel yang akan dianalisis.

Syarat kuvet :
-Tidak berwarna
-Permukaannya secara optik harus benar-benar sejajar.
-Harus tahan terhadap zat kimia.
-Mempunyai bentuk yang sederhana.
-Tidak boleh rapuh.
-Inert (tidak memberikan reaksi kimia).

Detektor
Mendeteksi gelombang cahaya yang ditransmisikan dan mengubahnya menjadi arus listrik

Pencatat :
sebagai alat pencatat arus yang diteruskan oleh detektor

THAT'S ALL..
THANK YOU
PUSTAKA
Harrison, M.K. 2011. Astronomycal Spectroscopy for Amateurs. New York: Springer science

Rosawinda, Tyas. 2013. ANALISIS KADAR BIOMOLEKUL PROTEIN/ASAM AMINO MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS. Lampung: Jurusan Kimia Fakutas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung

Skoog D.A. 1996.
Fundamental of Analytical Chemistry, 7nd ed
. Sauders College Publishing.

Umar, E. 2008. Buku Pintar Fisika. Jakarta: Media Pusindo

Watson, David.2009.
Analisis Farmasi : Buku Ajar untuk Mahasiswa Farmasi dan Praktisi Kimia Farmasi, Edisi Kedua
. Jakarta : EGC
Cara Kerja :
Sinar dari sumber radiasi diteruskan menuju monokromator
Cahaya dari monokromator diarahkan terpisah melalui sampel
Detektor menerima cahaya dari sampel secara bergantian
Sinyal listrik dari detektor diproses
Diubah ke digital
Hasil dan perhitungan dilakukan oleh komputer

Spektrofotometer UV-Vis
Shimadzu UV 2401PC
Tipe Instrumen Spektrofotometer
1. Single-beam instrument ( satu berkas sinar )
digunakan untuk kuantitatif dengan mengukur absorbansi pada panjang gelombang tunggal. Single beam menghasilkan pengukuran sinar UV dan sinar tampak. Skema Instrumen Single Beam :
2. Double-beam instrument ( dua berkas sinar )
Instrument yang digunakan dengan panjang gelombang 190 samapai 750 nm, mempunyai dua sinar yang dibentuk oleh potongan cermin yang membentuk V yang disebut pemecahan sinar. Skema instrumen Double Beam :

PRINSIP KERJA
1. Cahaya yang berasal dari lampu deuterium maupun wolfram yang bersifat polikromatis di teruskan melalui lensa menuju ke monokromator pada spektrofotometer dan filter cahaya pada fotometer.
2. Monokromator kemudian akan mengubah cahaya polikromatis menjadi cahaya monokromatis (tunggal).
3. Berkas-berkas cahaya dengan panjang tertentu kemudian akan dilewatkan pada sampel yang mengandung suatu zat dalam konsentrasi tertentu.
4. Oleh karena itu, terdapat cahaya yang diserap (diabsorbsi) dan ada pula yang dilewatkan.
5. Cahaya yang dilewatkan ini kemudian di terima oleh detector.
6. Detector kemudian akan menghitung cahaya yang diterima dan mengetahui cahaya yang diserap oleh sampel.
7. Cahaya yang diserap sebanding dengan konsentrasi zat yang terkandung dalam sampel sehingga akan diketahui konsentrasi zat dalam sampel secara kuantitatif.


Pertanyaan dari Ninda Sukmaningrum (12-26)
Bagaimana cara menentukan warna yang dihasilkan adalah warna X?
Ini sesuai dengan prinsip awal cara kerja spectroscopy UV-Vis, awalnya cahaya akan diberikan dan masuk ke diffraction grating. Diffraction grating akan berputar sampai menemukan warna yang cocok sesuai dengan panjang gelombang max dari sampel. Setelah itu melawati monokromator yang akan mengubah cahaya yang awalnya bersifat polikromatis menjadi monokromatis. Kemudian detektor akan menghitiung cahaya yang diterima dan mengetahui cahaya yang diserap sampel. Ini sesuai dengan prinsip lambert beer. Menurut panjang gelombang max yang diabsorsi, kita bisa langsung mengetahui warna yang diabsopsi dan warna yang ditampakkan.
Fungsi kuvet adalah sebagai wadah larutan sampel yang dimasukan ke dalam alat spektrofotometer.

Kuvet ada dua jenis yaitu:
Kuvet yang terbuat dari kuarsa baik untuk spektroskopi ultra violet dan juga untuk spektroskopi sinar tampak
Kuvet plastik dapat digunakan untuk spektroskopi sinar tampak.

Kadar protein ditentukan dengan metode Lowry (Lowry et al., 1951).
Sebanyak 0,1 mL sampel (susu) ditambahkan 0,9 mL akuades lalu direaksikan dengan 5 mL pereaksi C dan diaduk rata. Kemudian dibiarkan selama 10 menit pada suhu ruang. Setelah itu ditambahkan dengan cepat 0,5 mL pereaksi D dan diaduk dengan sempurna, didiamkan selama 30 menit pada suhu kamar. Untuk kontrol, 0,1 mL sampel diganti dengan 0,1 mL akuades, selanjutnya perlakuannya sama seperti sampel. Serapannya diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 750 nm.
Contoh: Kadar Protein Metode Lowry Menggunakan Spektrofotometer UV-VIS
Larutan standar: larutan BSA (Bovine Serum Albumin) dengan kadar 0, 20, 40, 60, 80, 100, 120, dan 140 ppm.
Didapatkan Absorbansi serum albumin sapi BSA
Pengukuran absorbansi sampel

Perhitungan Kadar Protein dalam Sampel

Diketahui :
X = Kadar Protein
Y = absorbansi

y = a + bx
a = 0,014
b = 0,002
r = 0,994

Didapatkan persamaan regresi Y = 0,014 + 0,002X

Y = 0,0687 – 0,0492
Y = 0,0195

X = ((0.0195– 0,014)/ 0,002)) x (10)
X = 27,5 mg/L
X = 27,5 x 10-3
X = 0,0275 mg/mL

Jadi, dalam 1 mL sampel susu tersebut terkandung 0,0257 mg protein.


Spektroskopi UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yg dianalisis, sehingga spektroskopi UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif.
1. Pertanyaan dari Elok Dea Orens U W(12-70)
Apa kekurangan dari analisis spektroskopi UV-VIS?
Kekurangan dari analisis dengan spektroskopi UV-VIS yaitu :
Terbatas pada molekul-molekul sederhana pada analisis kualitatif
Absorbsi dipengaruhi oleh pH larutan, suhu dan adanya zat pengganggu dan kebersihan dari kuvet
Hanya dapat dipakai pada daerah ultra violet yang panjang gelombang >185 nm
Pemakaian hanya pada gugus fungsional yang mengandung elektron valensi dengan energy eksitasi rendah
Sinar yang dipakai harus monokromatis
Syarat sampel harus ada gugus kromofor yaitu gugus yang mampu menangkap absorbansi
Bekerja pada larutan yang sangat encer
Untuk senyawa yang transparan
Kuvet yang digunakan harus kuarsa



Kelebihan
 
Panjang gelombang dari sinar putih dapat lebih terseleksi
Caranya sederhana
Dapat menganalisa larutan dengan konsentrasi yang sangat kecil
Murah atau tidak mahal sehingga sering tersedia di lab-lab jika dibanding dengan alat spektroskopi yang lain
Prosedur kerja relatif gampang

2. Pertanyaan dari Leriana Allyu (12-80)
Apakah spektroskopi UV-VIS dapat digunaka untuk mengidentifikasi senyawa yang tidak diketahui?
Jawab : Tidak bisa, karena syarat jika harus diukur dengan UV Vis harus mempunyai gugus kromofor, yakni gugus yang menyebabkan seyawa pewarna, gugus yang bertanggung jawab pada absorbsi REM, dan gugus yang berupa iktan tidak jenuh dan konfigurasi elektron berada pada eksitasi terendah. Selain itu, spektroskopi UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yg dianalisis, sehingga spektroskopi UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif.

Full transcript