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Radioinmunoensayos RIA

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by

Daniel Rodríguez Sánchez

on 1 December 2014

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Transcript of Radioinmunoensayos RIA

Radioinmunoensayos
RIA

¿Qué es el radioinmunoensayo?
Fundamentación de la técnica
¿Qué son los inmunoensayos?
Un inmunoensayo es un ensayo bioquímico que mide la presencia o la concentración de una macromolécula en una solución mediante el uso de un anticuerpo o inmunoglobulina.
Historia
Esta técnica fue desarrollada en 1950 por Rosalyn Yalow y Solomon Aaron Berson.

En 1977, el Dr. Yalow recibió el Premio Nobel de Medicina por el desarrollo de la RIA de insulina: la medición precisa de pequeñas cantidades de una hormona, tales revolucionó el campo de la endocrinología.

Con esta técnica, la separación del antígeno unido del no unido es crucial. Inicialmente, el método de separación empleado fue el uso de un segundo "anti-anticuerpo" dirigido contra el primero para la precipitación y centrifugación.

Los tipos de inmunoensayos según el marcador que se utilize pueden ser:
Radioinmunoensayo (RIA) :
el marcador es un isótopo radioactivo.

Enzimoinmunoanálsis (EIA):
el marcador es una enzima como por ejemplo la técnica de enzimoinmunoensayo conocido por su abreviatura ELISA.

Fluoroinmunoanálisis:
el marcador es una molécula fluorescente, por ejemplo FPIA.

Ensayo Inmunoquimioluminiscente
: la marca es en general una enzima capaz de catalizar una reacción quimioluminiscente.

Es un método sensible y especifico para
determinar reacciones Ag – Ac

La base del RIA consiste en la inhibición competitiva de la unión de un antígeno radioactivo (Trazador) a su antígeno específico por parte del antígeno no marcado
El sistema radioinmunológico descrito puede esquematizarse como una reacción reversible combinada:

- Se mezcla una cantidad constante de antígeno marcado radioactivamente y una cantidad constante de un anticuerpo para ese antígeno

- Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y anticuerpo (Ac)

- Se separa la fracción de antígeno que se ha unido de la que permanece libre (hay varias formas de hacerlo. En la figura inferior se utiliza un 2º anticuerpo dirigido contra el primero)

- se determina la radioactividad

- Si la muestra contiene además antígeno frío (no marcado), éste competirá con el marcado para unirse al anticuerpo, y se observará un descenso en la medida de la radioactividad

- Este descenso es proporcional a la concentración de antígeno frío en la muestra
Utilidad de la RIA en la actualidad


Para determinar hormonas, vitaminas, neuropéptidos, monoaminas y otras sustancias que se encuentran en pequeñas concentraciones en los fluidos biológicos y en otros muchos medios.


Las ventajas principales son su especificidad, sensibilidad y reproducibilidad que, unidas a la constancia de la señal isotópica y a la duración, hacen de este método uno de los más robustos de la tecnología moderna.


Las desventajas son la necesidad de equipos especiales y el uso de isótopos radiactivos, lo que implica la sujeción a múltiples normas para la utilización, conservación y desecho de estos productos, de acuerdo con las legislaciones de cada país y con las normativas internacionales
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