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PREPARACION DE LOS TEJIDOS

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by

Gustavo Alcala Martinez

on 25 February 2014

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Transcript of PREPARACION DE LOS TEJIDOS

Presentado por:
Gustavo Alcala Martinez
TECNICAS HISTOLOGICAS
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
PASOS
Se desarrolla esta técnica con el fin de estudiar y conservar los tejidos en su estado natural vivo.
POR QUE?
BIOPSIA
Es un procedimiento a través del cual se extrae una pequeña muestra viva de un cuerpo.
http://4.bp.blogspot.com/-vKrpKI4Yww0/UDFb6Ar-xlI/AAAAAAAAAXE/mLvniI7wNu4/s640/punch-1.jpg.
Sacabocados
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/2-fijacion-inmersion2.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/2-fijacion-perfusion-o.png.
DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO
MICROTOMO
VIBRATOMO
MICROTOMO DE CONGELACION
CRIOSTATO
Para la deshidratación de la muestra se debe exponer en una serie de baños graduales de alcohol,se inicia con una concentración del 50% y esta se va aumentando paulatinamente hasta llegar al 100% para la eliminación del agua.
Seguido del proceso de deshidratación se continua con el aclaramiento,en este proceso se agrega xileno (sustancia química capaz de formar una solución con la parafina fundida),que permite que el tejido se torne trasparente en este.
INCLUSIÓN
Es un método en el que la muestra se incluye en un medio adecuado que permite preservar su forma con el fin de facilitar los respectivos cortes. (el medio de inclusión más utilizado es la parafina).
En este procedimiento la solución fijadora se introduce a través del sistema circulatorio,gracias a esto el fijador logra acceder a todas las células del tejido por la red de capilares.
A diferencia de la inmersión la perfusión es capaz de fijar un animal completo.
PERFUSION
Es un método en el que la muestra se incluye en un medio adecuado que permite preservar su forma con el fin de facilitar los respectivos cortes. (el medio de inclusión más utilizado es la parafina).
INCLUSIÓN
INCLUSIÓN EN
PARAFINA
La gran mayoría de parafinas utilizadas poseen un punto de fusión al rededor de los 60 °C. Gracias a esta característica Podemos modificar las características de las parafinas añadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad, etcétera.
INCLUSIÓN EN
RESINA
Es utilizada para lograr apreciar la ultraestructura celular,esto se logra gracias a los cortes de tejido muy delgados denominados ultrafinos, es necesario incluir el tejido en un material de alta dureza como son las resinas de tipo epoxy, estas se infiltran en el tejido en estado líquido, seguido de polimerización sin afectar a la ultraestructura celular.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/3-resina.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/3-parafina.png.
ULTRAMICROTOMO
Son utilizados para cortar material incorporado en parafina, posiblemente son los más usados en los laboratorios de histología.
Un micrometro se compone por: una cuchilla, un portabloques y un sistema mecánico que acercar el bloque de parafina a la cuchilla a la distancia que se corresponde el grosor de la sección que pretendemos cortar.
MICROTOMO DE
ROTACIÓN
MICROTOMO DE
DESLIZAMIENTO
PROCESOS PRE CORTE
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-bloque-tiras.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-retalle-bloque.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-microtomo.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-microtomoDes.png.
El vibratomo es un instrumento con el cual se obtienen cortes de un grosor que puede varias entre las 40-50 µm hasta varios centenares de µm originando la extraccion de una muestra animal endurecida sólo mediante fijación
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-vibratomo2.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-vibratomo3.png.
Realiza cortes de decenas de µm de grosor, posee unaplataforma que se enfría a bajas temperaturas sobre la que se pone la muestra. Después de cada corte la plataforma se eleva un espacio correspondiente.
En los microtomos de congelación antiguos se producía la congelación mediante gas. Hoy en día se produce la congelación (de -30 a menos -40 °C) de la plataforma,esta se lleva acabo a través de un sistema de refrigeración ajeno al dispositivo de corte.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-microtomo-congelacion.png.
Es utilizado para recolectar cortes por congelación de 10 a 30 µm. Cuenta con un sistema de corte encerrado en una cámara cuya temperatura se puede regular, entre -20 y -30 °C (normalmente). El tejido se puede congelar con la rapidez que deseemos, un ejemplo es el nitrógeno líquido, pero es preferible depositar la muestra en la cámara del criostato hasta que consiga un equilibrio termico para obtener secciones homogéneas
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-criostato.jpg.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-criostato2.png.
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/imagenes/4-criostato3.png.
Posee un diseño de corte parecido al microtomo de parafina de rotación, pero mucho más preciso y sofisticado. Posee un delicado sistema que hace avanzar el bloque hacia la cuchilla ya que debe realizarlos a intervalos de varios nanometros.
TINCION
Los tejidos animales en su gran mayoría son incoloros, excepto los poseen algún tipo de color o pigmento como la sangre o la melanina de la epidermis.
Gracias a la industria textil y su necesidad de pintar las telas provocó un rápido desarrollo de los tintes o pigmentos en el siglo XIX.
Muchas de estas sustancias fueron usadas como colorantes en la histología de los animales desde mediados del siglo XIX hasta la actualidad, alcanzándose un enorme desarrollo y perfeccionamiento de nuevas técnicas según las necesidades del investigador.
Inmunocitoquímica
Son técnicas histológicas muy potentes basadas en la alta especificidad de unión de los anticuerpos a los antígenos contra los que se produjeron.
Tinciones generales
Son Aquellas que usan sustancias coloreadas que se unen a componentes tisulares por afinidad química.
Histoquímica
Son aquellas técnicas de tinción que implican la modificación química de algunas moléculas tisulares para posteriormente ponerlas de manifiesto con colorantes.
Lectinas
Son dominios de proteínas, como las selectinas, que son capaces de reconocer glúcidos que forman parte de polisacáridos. se usan para determinar el tipo de glúcido que aparece en las glicoproteínas de la membrana plasmática
Hibridación
Son técnicas basadas en la unión complementaria de las bases de ácidos nucleicos ejemplo:
adenina con la timina, o con el uracilo, y de la guanina con al citosina.
WEBGRAFIA
http://webs.uvigo.es/mmegias/descargas/tecnicas-fijacion.pdf
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/1-introduccion.php
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/2-metodos-fijacion.php
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/3-parafina.php
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/3-resina.php
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/4-corte.php
http://www.sebuscaimagenes.com/search/8/gracias.htm
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