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Ch 11.6-Culture cellulaire végétale - Cours 7

Chapitre 10 Protoplastes
by

Sophie Roy

on 23 March 2018

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Transcript of Ch 11.6-Culture cellulaire végétale - Cours 7

Chapitre 11.6 Protoplastes
Caractéristiques
Production
Culture
Stérilité mâle cytoplasmique
Fusion de protoplastes
Modifications génétiques
1- Régénération paroi
Étape critique très difficile
Densité assez grande
10 protoplastes/cm ou ml
Mesurée avec hématimètre
Milieu
Liquide (sans agitation car trop fragiles)
Solide avec agarose
Couche de ¢ nourricière
Purification
Méthode mécanique
En deux temps:


Sans paroi
Applications
Prochaine rencontre
Théorie
Chapitre 12.1
Transformation génétique de cellules végétales
Laboratoire
Le milieu de culture pour ETC est coulé pour vous
Suivi des projets 1, 2, 4, 5
Remise devoir 2
5- Embryogenèse somatique Suite protocole 11.4
Peser tube 15 mL stérile
Ajouter suspension
Centrifuger 5 min. à 300G
Enlever surnageant avec pipette pasteur et vide
Ajouter milieu MS sans régulateur
Suspendre le culot
Centrifuger
Enlever milieu
Peser tube
Ajouter milieu MS sans régulateur, concentration 2 à 5 mg/L
Labo aujourd'hui
2- Suspension cellulaire (Observations et partir une deuxième suspension)
Désinfection de graines pour ETC s'il vous reste du temps...
Suivi des projets:
4
Plasmolyse
(sln hypertonique)
Désinfection graines ou explants
Faire milieux culture pour ETC (ne pas ajouter le sucre)
1- Lignées cellulaires solides (Repiquage si besoin)
7- Méristèmes d'ail (Observations)
cellulase, hémicellulase, pectinase
Capacité d’introduction de matériel étranger
sucres et alcool difficilement métabolisables par la plante (13%)
Osmoticum:
Sensible pression osmotique
Très fragile
Mésophylle de feuille, cotylédons, cals, suspensions cellulaires
Matériel végétal utilisé:
Purification
Isolement mécanique ou enzymatique
3- Callogenèse, puis organogenèse, régénération ou embryogenèse
Mettre dans solution hypotonique pour créer turgescence
2- Division cellulaire (mitoses)
3
Stérilité mâle cytoplasmique
Vacuole: Compartiment spécifique de la cellule végétale. Elle permet le stockage de l'eau, d'ions, de sucres, de dérivés azotés et de produits de dégradation.
p.49
Cellulose
Hémicellulose
Pectine
Lignine
Protéines structurales
Méthode enzymatique
dans osmoticum
Étudier la physiologie membranaire et régénération paroi
Stimuler expression métabolites secondaires
Modifications génétiques
Isoler organites
Plusieurs méthodes disponibles:
Fusion des protoplastes (Hybridation)
Canon à gènes
Micro-injection
Transformation par
Agrobacterium
Électroporation pour insertion de plasmides
Hybride somatique
Hétérocaryon
Homocaryon (si deux noyaux identiques)
polyéthylène glycol (PEG)
N
S
5- Embryogenèse somatique
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