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“ANÁLISIS DE AGUA MEDIANTE LOS MÉTODOS DEL NÚMERO MÁS PROBAB

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by

Anghela Tank

on 7 December 2015

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Transcript of “ANÁLISIS DE AGUA MEDIANTE LOS MÉTODOS DEL NÚMERO MÁS PROBAB

“ANÁLISIS DE AGUA MEDIANTE LOS MÉTODOS DEL NÚMERO MÁS PROBABLE, TINCIÓN GRAM Y TÉCNICA DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA PARA LA DETECCIÓN DE COLIFORMES EN AGUA POTABLE EN EL AA. HH VILLA EL SOL DEL DISTRITO DE REQUE”
Integrantes:
Bustamante Jimenes Jhooseph Cieza Tarrillo Yakelin Julisa
Chuque Sanchez Jeyson Eduardo
Tank Guerrero Anghela Stefanny
Rojas Moran William Jesus
Lachos Laban Ronald
Pesantes Ronald

Introduccion
El agua es un recurso natural que cada día se vuelve más escaso, debido a que su demanda cada vez es mayor por el incremento poblacional e industrial de los últimos años, lo cual a su vez ha causado su deterioro por la contaminación que generan, así mismo cada día es más difícil la recarga de los mantos freáticos debido a la deforestación y la aparición de grandes complejos habitacionales que antes no existían en las zonas de recarga.

Objetivos
OBJETIVO GENERAL

• Al finalizar el presente proyecto se Determinara la calidad microbiológica del agua de consumo en el AA.HH “Villa el Sol II Etapa” distrito de Reque.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Análisis microbiológico del agua de consumo humano colectada.

• Determinar la presencia de coliformes totales mediante la técnica de NMP (número más probable), Tinción Gram y Filtración por Membrana.

Métodos
Numero mas probable:
Se basa en la determinación de presencia o ausencia (positiva o negativa) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes.

Tincion Gram:
Usado en bacteriología es la tinción de Gram. Este método divide las bacterias en dos grandes grupos, las Gram-negativas y las Gram-positivas.

Filtracion por Membrana:
Es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del poro 0.45 um
ANÁLISIS DEL LUGAR DE ESTUDIO

Este estudio se llevó acabo en tres etapas:

• La primera etapa fue la recopilación de datos sobre la zona por medio de encuestas.
• La segunda etapa se realizó la recolección de las muestras
• La tercera etapa se realizaron los análisis microbiológicos del estado actual de las aguas con el fin de calificar sobre su calidad para el consumo humano

Medios de cultivo
Caldo Verde Brillante:

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable.

Agar Endo:
Es un medio de cultivo diferencial y ligeramente selectivo utilizado para la detección de coliformes y otros microorganismos entéricos.

Gracias
DETERMINACION DE LA CALIDAD DE AGUA

Para la toma de muestras se realizaron en frascos de plástico esterilizados de boca ancha, con una capacidad de 250ml debidamente rotulados.

Una vez ubicado el lugar de muestreo se desinfectan alrededor de los envases que contienen el agua en las casas y luego se sumerge a una profundidad mínima recolectando la cantidad necesaria de la muestra, luego cerramos los frascos y los colocamos en bolsas herméticas.

De cada lugar se tomó una muestra por cada domicilio obteniendo en total 10 frascos con muestras de agua.

MATERIALES PARA METODO DEL NUMERO MÁS PROBABLE:

• 50 tubos
• 30 tubos
• 10 pipetas de 1ml
• 10 pipetas de 10ml
• 1 matraz 150 ml
• 50 Campanas de durham
• Agua estéril
• 1 Probeta
• Caldo Verde Brillante Bilis
• Calentador
• Agar Endo

MATERIALES PARA EL METODO DE TINCION GRAM

• Porta objetos
• Mechero
• Asa bacteriológica
• Microscopio
• Gotero


REACTIVOS

o Violeta de genciana
o Lugol
o Aceite de inmersión
o Safranina
o Alcohol

MATERIALES PARA TECNICA DE FILTRACION POR MEMBRANA

• Soporte
• Pinza metálica
• Embudo de Büchner
• Papel de filtro circular (de un tamaño que cubra la base del embudo sin sobrepasarla)
• Matraz de Kitasato
• Adaptador de goma o de caucho
• Varilla de vidrio
• Conexión a un sistema de vacío (bomba de succión, trompa de agua).
• El embudo de Büchner
• Papel de filtro pueden sustituirse por una placa de filtración.

METODO DE DILUSIONES SERIADAS

Una dilución en serie es la reducción progresiva, paso a paso, de la concentración de una sustancia en disolución. Para este método se utilizaron 5 tubos para cada muestra
En 5 tubos de ensayo según el tamaño se agregara 9 ml de agua destilada estéril y 1 ml de muestra si es en un tubo de ensayo grande o 4.5 ml de agua destilada estéril y 0.5 ml de muestra (solo se realizara en 1 tubo de ensayo)
Se rotula cada tubo con su respectiva serie
Se retira 1ml de la dilución del primer tubo de ensayo y este se pasara al siguiente y así sucesivamente.
Luego se usaron 5 tubos más para con 4.5 ml de CALDO VERDE BRILLANTE y 0.5 ml de la primera dilución de agua destilada y la muestra y se colocaron a 45 colocándole a cada uno una campana de Durham
Luego solo se utiliza las tres últimas series -3,-4,-5
Colocar en la estufa a 45 °C durante 24 a 48 horas.

ETAPA DE CONFIRMACIÓN


Preparamos agar ENDO, donde colocamos las muestras de nuestra agua de 〖10〗^(-3) a 〖10〗^(-5).
Colocamos nuestros viales cultivados en la estufa a 45 ºC por 48 horas.
Realizamos el método de Tinción Gram.
Finalmente colocamos nuestra porta objetos en el microscopio.

TINCION GRAM
Se extiende la muestra recogida en un portaobjetos de cristal con una gota de agua destilada estéril
Se pasa el portaobjetos por la flama del mechero; así, las bacterias quedan pegadas en la superficie.
Se añade violeta de genciana, un colorante que tiñe todas las bacterias de color púrpura. Se debe dejar durante un minuto para que haga efecto.
Se lava la muestra coloreada con agua y se añade lugol para impregnar el color
Luego se añade el alcohol para desteñir las bacterias que se deben teñir con el violeta de genciana. Después se lava de nuevo con agua para eliminar el alcohol.
Se añade fucsina, otro colorante que tiñe de rosa las bacterias que no se han teñido de color púrpura. Así se pueden observar al microscopio, aunque serán gramnegativos.
Luego se estudia la muestra con un microscopio e identifica bacterias teñidas.

RESULTADOS DE LA CANTIDAD DE GAS:
tiene gas , la campana de Durham se eleva = 1
No tiene = 0
Esta espeso = ½

Muestras:
La mayoría de las muestras están espesas (½)
solo una de las muestras contiene gas (1) = muestra 4 〖10〗^(-4)

RESULTADOS EN LA TINCION DE GRAM
En todas las muestras se encontró la presencia de la bacteria E.coli

FILTRACION POR MEMBRANA
• Tomamos muestras del agua para analizar.
• Tenemos preparados la bomba al vacío y los filtros.
• Añadimos un poco de la muestra encima del filtro y esperar a que drene el agua.
• Después de haber filtrado las muestras preparar Agar Endo para determinar la presencia de coliformes.
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