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CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF)

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on 23 March 2014

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Transcript of CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF)

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (TLC)
R E V E L A D O
Luz UV:

La introducción de la placa en vapores de yodo

El rocío con una solución de agual H2SO a 1 :1
PROCEDIMIENTO
DETERMINACIÓN DE Rf
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinadas
Método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas y relativamente pequeñas.

En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de polipéptidos y ácidos nucleicos

CROMATOGRAFÍA
FASES
M Ó V I L


( llamada también activa)
Transporta las sustancias que se separan


-éter de Petróleo - cloruro de metileno
- n-hexano - acetato de etilo
- ciclohexano - acetona
-tolueno - iso-propanol
- dietil-éter - etanol
- f-butil-éter - metanol
- cloroformo - ácido acético



Compuesto unido a una base sólida


- Gel de sílice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
- Oxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)
-Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
-Poliamidas
Domitzel Zagal Alvarado
Fisicoquímica de macromoléculas
Marzo 2014
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MORELOS
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

FASES
ESTACIONARIA
MÓVIL
-Determinar el grado de pureza de un compuesto

- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.

- Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo desaparecen los reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cuando la reacción ha acabado.

Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de
la mezcla entre dos fases inmiscibles:
E S T A C I O N A R I A
Eluyentes
Adsorbentes
1 cm.
M U E S T R A
Eluyente
a)Distancia de muestra del punto de aplicación
Rf=
b)Distancia que recorre el disolvente hasta el
frente del eluyente

(coeficiente de reparto), relacionado con la solubilidad relativa de un
compuesto entre la fase estacionaria y fase móvil, y que depende de su
estructura química y su hidrosolubilidad/liposolubilidad.

Una mayor resolución, obteniéndose por lo general manchas más pequeñas.
Mayor velocidad de separación.
Pueden utilizarse un gran número de materiales como soportes y disolventes.
Los compuestos pueden ser detectados con facilidad y su recuperación es muy simple.

VENTAJAS
http://organica1.org/1311/1311_6.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/ChrTLC.html
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm
FACTORES QUE AFECTAN A LA TLC
TEMPERATURA
A menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase
estacionaria.
La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire
LIMPIEZA DE LAS PLACAS
Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después dejar secar completamente antes de aplicar la muestra
Pureza de los disolventes.
REFERENCIAS:
http://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/11%20CROMATOGRAF%C3%8DA%20DE%20CAPA%20FINA%20DE%20AAs.pdf
FOTOS:
R. Eslava
TLC
La identificación de tales compuestos se suele realizar comparando sus Rf con los de compuestos de referencia (patrones) de naturaleza química conocida.
Alternativamente, los diferentes compuestos, una vez localizada su posición por un método no destructivo, pueden eluirse de la placa raspando las zonas correspondientes y extrayendo el polvo obtenido con un solvente adecuado.

Cromatografía = escribir en colores
PLANA O POR COLUMNA
PRINCIPIO FUNDAMENTAL:

FENÓMENO DE ADSORCIÓN SELECTIVA
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