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EXTRACCION DE ADN

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by

claudia ballesteros

on 10 October 2014

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Transcript of EXTRACCION DE ADN

EXTRACCION DE ADN
RENDIMIENTO, CALIDAD Y PUREZA
PROTECCION DE LA MUESTRA
Muestras tejido solido
Liquidos biologicos extracelulares
Muestras de suspension celular
Conclusión
Contaminación de material
Biológico

Contaminación microbiológica

Contaminación química


métodos de extracción
FENOL CLOROFORMO

CHELEX

SALTING OUT
PASOS BASICOS DE LA EXTRACCION
Disrupcion celular (Lisis)

Eliminacion de las proteinas (Extraccion)

Concentracion del DNA (precipitacion)

Lavado

Resuspension
DISOCIACION DE LA MUESTRA
Fragmentación mecánica

Disgregación química

Digestión Enzimática
3 FASES DE DESARROLLO
- Preanalitico

- Analitico

- Posanalitico

Protocolo de extracción de DNA por salting-out para pequeños volúmenes de sangre
Para que sirve la extracción de ADN?

Técnicas de extracción?


Cantidad de material de partida

Cantidad de tejido

condiciones del material de inicio

contaminantes del material biológico
Presentado por:
Yesika Alvarez
Claudia Ballesteros
Isabela Romero
Daniela Fajardo
Rodolfo Garcia
Cesar Orrego
William Londoño
Juan Esteban Lopez
Extraccion de ADN
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/
Mario Alejandro Riera1, María Eugenia Rojas1, Pedro Darío Zapata1
SALTING OUT
PROCESOS POSTERIORES
PCR (STR)
ELECTROFORESIS
El método de extracción salting-out permite la obtención de DNA de calidad y pureza necesarias para la amplificación mediante PCR a partir de pequeños volúmenes de sangre, con un volumen mínimo de 0,5 µL de sangre de partida.
MATERIALES
EDTA (anticoagulante)
Tris-HCL, Triton X-100 y Sacarosa (lisis globulos rojos)
Centrifugador
Buffer globulos blancos
solucion proteinasa K
SDS
Acetato de Potasio
Isopropanol
Etanol
Agua esteril
EDTA
Lisis globulos rojos
Centrifugacion
12000 rpm/3 min
Lisis globulos blancos
Incubacion 65° C y agitacion en vortex 10 min
Precipitacion por
Saltin out
Centrifugacion
12000 rpm/5 min
Precipitacion
Isopropanol
Centrifugacion
12000 rpm/5 min
Lavado
Etanol 70%
Centrifugacion
12000 rpm/5 min
Extraccion de Alcohol
Resuspension en agua esteril
ARTICULO
Separacion de las celulas
Metodos de centrifugacion y sedimentacion
- Diferencial
- Isopinica

Citofluorometria de flujo

Separacion directa de tipos de
celulas
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