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Técnicas de electrofisiología

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by

Rocio López

on 14 November 2012

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Transcript of Técnicas de electrofisiología

Técnicas de electrofisiología Registro del potencial de membrana Fijación de voltaje Técnica de Patch clamp *Fue desarrollada por Cole en 1949
*Esta técnica permitió registrar la corriente iónica que atraviesa la membrana.
*Se llama así por que puede registrar la corriente que fluye a través de la membrana de un modo que sea repetible e interpretable se debe a hacer voltajes fijos.
*Combinando esta técnica con un poco de farmacología, Hodgkin y Huxley descubrieron la base iónica del potencial de acción: una corriente inicial de entrada de sodio y una posterior corriente de salida de potacio. Rocío López
Vanessa Díaz
Yoezer Flores
Ivonne Valero

*Principal dificultad:
Tamaño de la célula muy pequeño

Primeros registros de axones de calamares En la actualidad la técnica se lleva a cabo con un electrodo de vidrio muy fino
Se pueden construir a partir de capilares de vidrio y el elemento conductor es la solución iónica concentrada con que son rellenados.
 
Cell attached (adherida a la célula)
Whole cell (célula completa)
Outside out (exterior hacia afuera)
Inside out (interior hacia afuera) DIFERENTES MODELOS DE PATCH CLAMP *Estudiar los canales iónicos en diferentes niveles, por ejemplo, se puede tanto utilizar la técnica de whole cell (célula completa) para analizar la actividad de todos los canales de la célula como realizar registros de canal único.

 *Manipular fácilmente la composición tanto del medio extracelular como del intracelular durante un registro Las diferentes configuraciones del patch clamp, ayudan al investigador a: *Una técnica electrofisiológica para medir corriente eléctrica que pasa a través de la membrana en un canal sencillo en células.
*Fue desarrollada por Neher y Sakmann en 1983
 
  *Consiste en la introducción de un electrodo de registro en el interior de la célula mientras se mantiene otro electrodo de referencia en el exterior. *Se utiliza una micropipeta que succiona y pega entre sus bordes un área de la membrana. Eventualmente proporciona el registro de la actividad de un solo canal iónico y la medida directa de sus propiedades 


*La eficiencia de esta técnica  requiere que la membrana esté libre, es decir, separada de otras células, libre de tejido conjuntivo, de restos celulares, etc, para que de esta forma, la pipeta se pueda adherir de una manera eficiente a la membrana celular. 
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