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Recuento Microbiano

Microbiología e Inmunidad Bucal Seminario II
by

Ursula Pantigozo Moran

on 11 September 2014

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Transcript of Recuento Microbiano

Recuento Microscópico en Cámara de Neubauer
Métodos y Técnicas del Conteo de Microorganismos
LA CÁMARA DE NEUBAUER
Es un portaobjetos especial con una graduación en superficie y unas medidas muy concretas.
Superficie: 9 mm².
Consta de 9 recuadros de 1 mm por lado.
Recuadro central: dividido en 25.
La muestra se distribuye en 400 celdillas.
Profundidad: 0.1 mm (excavación).
Volumen: 0.1 mm³.
Se coloca la muestra entre el portaobjetos y el cubreobjetos.
Se deja reposar sobre la plataforma del microscopio unos minutos.
Se cuenta el número de células en varias celdillas.
Se obtiene un promedio, producto del conteo de 5 cuadrículas.
Se multiplica por 25.
VENTAJAS
INCONVENIENTES
Es un método muy rápido.

Es muy eficaz para células relativamente grandes.
Sólo sirve para suspensiones celulares relativamente concentradas.

No hace distinción entre células vivas y células muertas.

Con respecto a bacterias móviles, se debe inmovilizarlas previamente.

Es impreciso.
PROCEDIMIENTO
Recuento en Placa
FINALIDAD
Verificar la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfección.
Tener una idea sobre la alteración incipiente de los alimentos.
Poner de manifiesto las fuentes de contaminación durante el proceso de elaboración de los alimentos.
Indicar la calidad de microbios de una determinada muestra.
Controlar el crecimiento microbiano o determinar la biomasa de lo organismos viables.
USOS
Cuando se deba efectuar soluciones , se efectuará el conteo final tomando como criterio microbiológico el escoger aquella placa que presente entre 30 - 300 colonias, a partir de la cual se hará la estimación respectiva.
Se basa en la presunción de que cada célula bacteriana pueda crecer en un medio de cultivo sólido formando colonias.
El Número Más Problable
Se fundamenta en la conjunción de cálculos estadísticos y pruebas bioquímicas que dependen del organismo que se evalúa.
Se debe tener en cuenta los límites de confianza para las diferentes combinaciones de los resultados positivos y negativos; así como el volumen usado en los tubos al realizar la prueba y las diluciones respectivas.
(cc) image by nuonsolarteam on Flickr
Peso Seco
Es la técnica más directa para la estimación cuantitativa de una masa de células y probablemente la más segura y reproducible.
Solo puede utilizarse con suspensiones muy densas de células.
No diferencia células vivas y muertas.
Su sensibilidad es limitada.
Consiste en la separación, secado y peso de las células del medio.
Turbidimetría
Sistema Nefelométrica de McFarland
RECUENTO MICROBIANO
Estima la turbidez de una suspensión bacteriana mediante:
Fotómetro o Espectrofotómetro
Mide la luz transmitida:
"La disminución de esta luz es proporcional a la concentración de microoganismos".
Nefelómetro
Se sustenta en contar con una batería de tubos de ensayo con diferentes concentraciones de cloruro de Bario, la que produce turbidez en cada uno de ellos.
INCONVENIENTES
Es un método poco preciso.
Sólo se emplea cuando no hace falta exactitud.
Ha sido desplazado por los métodos espectrofotométricos.
Estándares de Mcfarland:
Son tubos etiquetados del 1 al 10 que son llenados con una suspensión de sales de Bario.
Cada tubo aproxima la turbidez de la solución de bacterias correspondiente al nÚmero de la escala de McFarland.
La escala de Mcfarland:
Escala enumerada del 1 al 10 que representa la concentración específica de bacterias por mililitro.
Está diseñada para estimar las concentraciones de bacterias Gram-.
Mide la luz dispersa:
"A mayor dispersión, mayor concentración microbiana".
FUNDAMENTO BÁSICO
La luz interactúa con el sistema electrónico molecular dipolo de la suspensión, aún cuando la luz no sea absorbida. La interacción es tal que la luz es disipada al igual que la longitud de onda.
LEY DE LAMBERT-BEER:
La absorbancia es proporcional a la concentración y la aplica a la medida de turbidez .
La intensidad de la luz disipada depende inversamente a la cuarta parte de la potencia de la longitud de onda.
(cc) image by anemoneprojectors on Flickr
Ventajas
Inconvenientes
Es más exacta y precisa.
Es un método de recuento automatizado que da resultados con cálculos matemáticos.
La presencia de precipitados o sustancias producidas por las bacterias puede aumentar turbidez.
No puede medir bacterias móviles.

No distingue células vivas de muertas.
Es impreciso si el número de microorganismos es escaso.
Es lento y subjetivo.
La forma de luz disipada depende del tamaño, la forma, y el índice de refracción del objeto.
VENTAJAS
INCONVENIENTES
Se deben emplear balanzas muy exactas.
VENTAJAS
DESVENTAJAS
No mide el número total de células sino únicamente las viables.
Es lento y tedioso.
No es preciso, pues la precisión depende del recuento de un número elevado de colonia.
Tiene una gran sensibilidad. En condiciones y medio adecuados, se puede detectar hasta una sola célula viva.
No requiere de equipo complicado.
VENTAJAS
DESVENTAJAS
(cc) image by anemoneprojectors on Flickr
Técnica fácil.
Proporciona un 95% de posibilidades de que la población bacteriana está dentro de un determinado margen.
Idea general de la población bacteriana.
Permite determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido.
El método es popular aunque poco exacto.
El método del número más probable nos proporciona un recuento de células viables. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.
Se realizan diluciones seriadas al décimo de la muestra de cultivo, en un medio líquido.
Se incuban las muestras de dichos tubos problema.
Se examinan los tubos: los que fueron inoculados con células microbianas se pondrán turbios, mientras que los que no permanecerán transparentes.
A medida que se aumenta el factor de dilución, se alcanzará un punto en el cual algunos tubos contendrán tan sólo un organismo y otros, ninguno.
La precisión del número más probable aumenta con el número de tubos que se usan, aunque cinco tubos por dilución se considera como una relación apropiada entre la precisión y la economía.
Al determinar la probabilidad de que los tubos no recibieran ninguna célula, se puede determinar el numero más probable de microorganismos en la muestra original, utilizando una tabla estadística.
Consiste en el plaqueo de un volumen precedente de la muestra que se analiza.
El resultado es en función de una serie de factores y los cultivos pueden hacerse tanto en superficie como en profundidad.
Se emplea placas Petri que contengan el medio de cultivo idóneo para el crecimiento bacteriano.
Se siembra un volumen conocido de muestra.
Se procede a contar el número de colonias.
Se preparan diluciones, si la cantidad de bacterias es elevada.
Se siembra un determinado volumen en la placa Petri, para luego calcular el número de bacterias por mililitro.
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
Método de Filtración
Se basa en el hecho de que la suspensión microbiana fluye a través de un papel filtro, donde las formas celulares quedan retenidas.
Con la ayuda de pinzas estériles, se retira el papel filtro y se deposita en la superficie de agar nutritivo.
Se incuba la placa, y se contabiliza el número de colonias que aparecen en ella, deduciéndo el número de microorganismos por mililitro de suspensión.
PROCEDIMIENTO
Es utilizado cuando el número de bacterias es bajo.
En la placa del medio de culivo, crecerán tantas colonias como bacterias hayan quedado adheridas al filtro.
Cuando la concentración es baja y el volumen de la muesta es grande , la muestra se hace pasar por un filtro cuyo poro retenga la bacteria. Éstas serán transferidas a un medio de cultivo donde serán contadas las bacterias.
VENTAJAS
DESVENTAJAS
Nos permite separar las bacterias del medio acuso.
Hay la posibilidad de que no todas las bacterias se queden en el filtro o sean transferidas.
Los métodos de recuento microbiano se clasifican en:

Métodos Directos:

Métodos Indirectos:

Permiten el recuento de todas las células.
Se basan en la medida de la evolución del número de células vivas o del número de partículas.
Requieren de preparaciones limpias, sin partículas extrañas.
Miden el total de bacterias viables.
Se basan en la medida de algún parámetro de cultivo que nos permite deducir información sobre la evolución del número de microorganismos.
Miden la propiedad de la masa de las células
Ejemplos: Recuento en Cámara, Recuento en Placa, Número Más Probable, Filtración, Sistema Nefelométrico de McFarland.
Ejemplos: Peso seco y Turbidimetría.
POR: FABIOLA LUCÍA PANTIGOZO MORÁN
UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA
SEMESTRE 2014-20
MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA BUCAL
SEMINARIO I
¡GRACIAS!
Procedimiento
Se tara un tubo de centrífuga.
Se centrigufa el cultivo y se elimina el sobrenadante.
Se seca el sedimento (105ºC, toda la hoche), hasta un peso constante.
Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso húmedo.
R.M EN CAMARA DE NEUBAUER
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