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Material de apoyo para el laboratorio de citogenetica MN

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Aurea Jenny

on 20 February 2014

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Transcript of Material de apoyo para el laboratorio de citogenetica MN

Fundamento de la técnica de MN.
Durante la proliferación en el proceso de eritropoyesis y de mecanismos de formación de micronúcleos, las células continúan dividiéndose y si son administradas sustancias de estudio, pueden actuar y causar daño a los cromosomas. Estas anomalías (fragmentos de cromosomas o cromosomas enteros) pueden retardarse en la división celular y no pueden integrarse en los núcleos hijos, quedándose en el citoplasma en forma de micronúcleos (
Krishna y Hayashi, 2000
).
En situaciones patológicas aumentan los MN los cuales representan cromosomas o restos de cromosomas que se separaron del huso mitótico durante la mitosis anómala. En condiciones normales los MN surgen de la fragmentación nuclear o como consecuencia de la expulsion incompleta del núcleo. Se observan de manera típica en individuos esplenectomizados, y en anemias megaloblásticas
(William et al, 1875
).
Sistemas de ensayo
El ensayo de micronúcleos (MN) ha sido utilizado ampliamente para evaluar el riesgo de genotoxicidad, tanto in vivo como in vitro.
El ensayo de MN, cuando se realiza adecuadamente, detecta clastogenicidad debido a la rotura de cromosomas) y también aneugenicidad, debido a la pérdida de cromosomas como resultado de la disfunción del aparato mitótico (González et al., 2003).
Eritrocito policromático (EPC).
Los eritrocitos policromáticos (EPC) son células jóvenes (reticulocitos) recientemente liberados a la circulación.
Presentan una coloración mezclada de basofilia y eosinofilia por lo que presentan un tinte azulado violáceo, son generalmente un poco mayores que los eritrocitos normocrómicos.
Su coloración azulada es por la presencia de ácido ribonucleico en el momento de su diapedesis hacia la circulación y por la falta de aprox. 20% del contenido final de hemoglobina
(Hernández, 1996; Kirsch-Volders etal., 1997
).
Eritrocito normocrómico (ENC).
Los eritrocitos normocrómicos, son eritrocitos maduros, son más pequeños que los eritrocitos policrómaticos, son acidofilos y se tiñen de color naranja claro o color naranja-rosado con Giemsa.(
Krishna y Hayashi, 2000
).
Su coloracion naranja rosado es debido a que están constituidos principalmente de hemoglobina. (
Barratt and Rodford, 2001; Schmid,1975, William et al, 1875
).
Micronúcleos (MN).
Material de apoyo para el laboratorio de citogenética de FES Cuautitlán campo uno, UNAM.

Formación de MN.
El mecanismo de formación de micronúcleos se lleva acabo en la médula ósea junto con la eritropoyesis o el ciclo celular del eritrocito, el cual constituye un desarrollo continuo iniciando con la célula totipotencial seguida de la progresión normoblástica hasta llegar al eritrocito maduro (
Hirai et al., 1991
).
Figura 2. Mecanismo de formación de Micronúcleos durante la eritropoyesis.
¿Qué es?
Los micronúcleos (MN), también conocidos como cuerpos de Howell-Jolly en hematología, son restos de cromatina que se encuentran separados del núcleo principal y que se forman a partir de la ruptura de fragmentos cromosómicos o bien por aquellos cromosomas que sufres un rezago anafásico (
Kirsch-Volders, 2006
), lo cual se traduce en la aparición de un pequeño núcleo en células anucleadas como los eritrocitos o bien en el citoplasma de nucleadas como linfocitos o espermatogonias (
Hernández, 1996; speit y Henderson, 2004
).
Los cuales son característicos por ser de forma redonda de un diámetro de 0.4-0.6 μ. Estos micronúcleos en condiciones patológicas aumentan en numero, lo cual se puede asociar a un daño cromosómico(
Kirsch-Volders, 2006)
.
Técnica de micronúcleos
Se recomienda por las agencias reguladoras en todo el mundo para llevar a cabo como parte de la evaluación de la seguridad del producto a comercializar (
Krishna y Hayashi, 2000
).
Esta prueba se puede realizar en una gran variedad de células tanto in vivo (en médula ósea, sangre periférica y células fetales de hígado) como in vitro utilizando células tanto de animales como humanas por ejemplo, se ha reportado esta prueba en hepatocitos de rata en células de hámster chino V79 e incluso linfocitos humanos y queratinocitos
(Hernández, 1996
).
Imagen 5. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); uno con mironúcleo; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado) .
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 1. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 2. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 3. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 4. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 6. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); uno con mironúcleo; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 7. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); uno con mironúcleo; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 8. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); uno con mironúcleo; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 9. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosada); uno con artefacto.
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 13. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); uno con mironúcleo; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado); dos con un mironúcleo.
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
EPC
ENC
EPC
ENC
EPC
ENC
EPC
ENC
EPCMN
EPCMN
EPCMN
EPCMN
ENC con artefacto
EPCMN
ENCMN
ENCMN
Imagen 10. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado); uno con micronúcleo.
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 11. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo) y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado); uno con micronúcleo.
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Imagen 12. Sangre periférica teñida con Giemsa. Eritocitos Policrómaticos (azulado violáceo); con dos micronúcleos; y Eritrocitos Normocrómicos (naranja-rosado).
Fotografía: Laboratorio de citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Eritrocito Polocrómatico
Micronúcleado
La detección de eritrocitos policrómaticos micronúcleados (EPCMN) tanto en medula ósea como en sangre periférica de roedores es un índice muy sensible del daño producido por radiaciones y por mutágenos químicos, por lo que, este índice permite establecer el daño de manera mas valida y confiable, incluso a pesar del efecto que tenga el mutágeno y/o la dosis sobre la cinética de los procesos que ocurren desde la producción del daño al ADN hasta la aparición del EPCMN en la sangre
(Pimentel et al., 2006
).
Genotoxicidad
El concepto de genotoxicidad es un término que hace referencia a cualquier tipo de daño causado sobre el material genético. (
Guzmán, 2008
).
Se recomienda para determinar genotoxicidad en el ensayo de micronúcleos se analice 200 EPC en medula ósea y 1000 EPC en sangre periférica por cada animal (
Rocha Y., 2008
).
Citotoxicidad
Para obtener la citotoxicidad se recomienda se determine la relación entre los EPC y el total de eritrocitos (EPC+ENC) en un recuento de al menos 1000 eritrocitos si se trata de sangre periférica
(Rocha Y., 2008
).
Bibliografía
Barratt Martiin D. and Rodford Rosmery A. (2001). The computational prediction of toxicity. Current Opinion in Chemical Biology, 5: 383-388
González BJI, Creus A., Marcos R., Molla R., Zapatero J. (2003). The mutagenic potential of the furylethylene Derivative 2-Furyl-1-nitroethene in the Mouse Bone Marrow Micronucleus Test Toxicol Sci 72 (2): 359-62.
Guzmán C. A. (2008). Estudio del potencial genotóxico del E-5842, un fármaco experimental antipsicotico con afinidad por el receptos sigma, y del mecanismo de inducción de eritrocitos micronucleados en ratón mediante hipotermia. Tesis Doctoral. Universidad Autónoma de Barcelona. España.
Hernández C. A. (1996). Efecto anticlastogénico de la clorofila en contra del nitrito de sodio evaluado en cepa NIH. Tesis profesional FES-Cuautitlán. UNAM. México.
Hirai O., Miyamae Y., Fujino Y., Izumi H., Miyamoto A., (1991). Prior bleeding enhanced the sensitivy of the in vivomicronucleus test. Mutation Researches 264: 109-114.
Kirsch-Volders M. (2006). The in vitro micronucleus test: from past to future Mutation Reserchh 607: 2-4
Krishna A., Hayashi M. (2000). In vivo rodet micronucleus assay: protocol, conduct and data interpretation Mutation Research 455: 155-166.
Pimentel P. E., Ortiz M. A. R. y Breña V. M. (2006). Tópicos de genética. Universidad Autónoma del Estado de México. México Pp 209-210.
Rocha Y. (2008). Estudio genotóxico mediante la prueba de micronúcleos del compuesto Tioformolínico LQM 319. Tesis de licenciatura. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán. UNAM.
Schmid W. (1975). The micronucleus test. Mutation Researches. 31:915
Speit G., Henderson L. (2004). Review of the in vivo genotoxicity test performed with styrene. Mutation Research Article in press.
William J. W., Beutler E., Erslev J. A., Rundles W. R. (1875). Hematología. Salvat editores Barcelona, España.
ENCMN
ENCMN
EPC con dos MN
Galería de imágenes.
Fotografías del Laboratorio de Citogenética. FES-Cuautitlán. UNAM. 2013.
Figura 1. Mecanismo de formación de Micronúcleos durante el ciclo celular.
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