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ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, CEPAS CONTROL Y APLICACIONES DE LA NORMA ISO 11133

Acerca de los procedimientos a seguir respecto del control de calidad, siguiendo normas técnicas internacionales
by

Maryory Galvis

on 25 May 2011

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Transcript of ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, CEPAS CONTROL Y APLICACIONES DE LA NORMA ISO 11133

Almacenamiento de cultivo deshidratado Porque Absorben agua del exterior
por cambios de temperatura Consumo de nutrientes
Cambios en pH
Cambios del Medio Exposición a la luz Cambios del medio Reconstitución o Rehidratación Determina la Eficiencia del Medio de Cultivo Elementos de uso: Preparación 1. Agregue cantidad indicada del medio a la mitad del volumen de agua requerido 2. Mezcle hasta homogenizar 3. Agregar el resto del agua 4. Ajustar el pH (sin NaOH, HCl 0.1) Distribución en medios de placa Pruebas de esterilidad Para cada lote que se prepare debe tomarse una muestra de un 10% y someterla a control de esterilidad a 35°C por 24 horas Almacenamiento del Medio preparado evitar la desecación Control de calidad en tinciones Controles diarios con cepas de bacterias de referencia maryo CARACTERÍSTICAS Y NECESIDADES Medios de cultivo Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproducción y la identificación de los microorganismos. ☺Contienen sustancias nutritivas
☺pH adecuado
☺Deben estar estériles. Incubación CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Su estado físico Según la fianlidad en microbiología No selectivos:

Contienen suficientes nutrientes como para soportar el crecimiento de gran variedad de microorganismos. Selectivos:

Permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo. Enriquecido:

Son medios no selectivos que se le agrega sustancias como ser sangre, suero, albúmina, etc... Para microorganismos exigentes. Diferenciales:

Son medios de cultivo que permiten establecer diferencias entre diferentes tipos microorganismos. OBTENCIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 1. El laboratorio debe registrar la fecha :
de recepción
de apertura del envase.
de caducidad El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas:
Envases: deben estar herméticamente cerrados. (especialmente medios deshidratados)
No deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento o un cambio de color. CONTROL DE CALIDAD EL AGUA DESTILADA Controles periódicos: Requisitos del agua destilada: Conductividad.
pH
Contaminación microbiana
Libre de sustancias bactericidas, inhibidoras o interferentes.
Se debe llevar un registro actualizado de los mismos. REQUISITOS A VERIFICAR EN LOS MEDIOS DE CULTIVO EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS REACTIVOS Realizo controles positivo y negativo utilizando microorganismos que sean trazables a colecciones de cultivos nacionales o internacionales reconocidas CULTIVOS DE REFERENCIA El número y la elección del género y especie de las mismas dependerá de los ensayos que se efectúan y las necesidades particulares de estos últimos. Término colectivo que se refiere a cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo VIABILIDAD PUREZA ESTABILIDAD Son microorganismos definidos: Por lo menos a nivel de género y especie catalogados Muy caracterizados de origen desconocidos RECONSTITUCION DE LAS CEPAS DE REFERENCIA Las Cepas de referencia ingresan al laboratorio de microbiología se registran en planilla según procedimiento.
Las Cepas de referencia se almacenan entre 0-5 º C hasta su uso. Las Cepas de referencia se reconstituyen y se siembran utilizando el medio de cultivo, las condiciones de incubación y el procedimiento indicado en las instrucciones para cada tipo de microorganismo del organismo proveedor de las cepas. En paralelo, a las Cepas de referencia, se les realiza un control de calidad de pureza y viabilidad y se registra. CONTROL DE CALIDAD DE PUREZA Y VIABILIDAD Se realiza a diferentes niveles del proceso. (Cada Vez Que Hago Un Repique) Su finalidad es asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y sus caracteres bioquímicos. Frecuencia de realización de este control: para las cepas de reserva almacenadas el laboratorio la establecerá en cada caso En caso de no presentar las características establecidas se ejecuta la Acciones correctivas establecida en el procedimiento. CEPAS DE RESERVA CREF Cres Cres Cres Cres Cres Cres Cres CEPAS DE TRABAJO Obtención de cepas de trabajo:
Los cultivos de trabajo se obtienen a partir de la Cepas de reserva sobre un medio sólido o líquido no selectivo adecuado utilizando un asa estéril e incubando en condiciones adecuadas.
Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas. GRACIAS ASEGURAMIENTO DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, CEPAS CONTROL Y APLICACION DE LA NORMA ISO/TS 11133". Ponentes:
Maryory Galvis Pedraza
Julian Londoño Lenis
Estudiantes de Bacteriología y Laboratorio Clínico TEMAS: • Definiremos lo que es la norma ISO 11133
• Definiremos la importancia del aseguramiento de la calidad de medios de cultivo y cepas control.
• Una breve descripción el aseguramiento de la calidad de medios de cultivo y cepas control. Presentación del curso de
ASEGURAMIENTO DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, CEPAS CONTROL Y APLICACION DE LA NORMA ISO/TS 11133".
En relación a los requisitos ISO/IEC 17025: 2005 CURSO:

ASEGURAMIENTO DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, CEPAS CONTROL Y APLICACION DE LA NORMA ISO/TS 11133". En relación a los requisitos ISO/IEC 17025: 2005 OBJETIVOS • Aportar los conocimientos necesarios para una correcta comprensión e interpretación de la norma ISO/TS 11133
• Establecer propuestas metodológicas para la gestión de compras de medios de cultivo
• Ofrecer herramientas necesarias para un correcto manejo del material de referencia en microbiología
• Brindar requisitos necesarios para el control instrumental involucrado en la preparación y control de medios de cultivo. DESTINATARIOS Bacteriologos y otros profesionales que trabajen en Control de Calidad, Aseguramiento de la calidad, Técnicos y Analistas de laboratorio. PROGRAMA PRELIMINAR 1. Medios de cultivo

• Clasificación.
• Preparación.
• Adquisición de medios de cultivo.
• Especificaciones de calidad y certificados.
• Microorganismos recomendados por la ISO/TS 11333 para el control de medios mas utilizados en el laboratorio de microbiología. 2. Cultivos de referencia. • ¿Qué es un cultivo de referencia? ¿Cómo se demuestra? ¿Por qué son necesarios? • Diferencias entre cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo. • Adquisición de cepas de referencia. Proveedores y Certificaciones. • Manipulación. Mantenimiento de cepas de referencia. Métodos de conservación preparados en el laboratorio. Sistemas comerciales • ¿Repique o reconstitución? • Control de calidad de cepas. Factores a tener en cuenta.

3. Control instrumental. • Requisitos para la verificación y control del instrumental involucrado. • Calibración y verificación de Balanzas. Validación de Autoclaves. Estufas y termómetros. • Como cumplir con las exigencias de una Auditoria de los puntos anteriormente

Para mayor información:

Contactar a la escuela de Bacteriología y Laboratorio Clínico Tel 558 19 29 ¿Que es la norma ISO 11133? La norma ISO 11133, es la norma ISO que da las directrices para la preparación y producción de medios de cultivo y hace referencia el buen manejo de las cepas de control de calidad. * ISO 11133:1 establece la terminología general relacionada con la garantía de calidad, especifica requisitos mínimos para la preparación de medios de cultivo utilizados para el análisis microbiológico de los productos destinados al consumo humano o animal. También es aplicable a los medios de cultivos para el análisis microbiológico de todo tipo de agua. * ISO 11133:2 estable la metodología practica para la evaluación de los medios de cultivo ¿Cuál es al importancia de esta norma en el laboratorio de microbiología(sean estos clínicos, industriales o de alimentos)?

El laboratorio debe asegurarse que la calidad de los medios de cultivo y reactivos sea apropiada para los ensayos realizados. Este es un punto crítico! Pero……

¿Cómo se asegura su calidad?
Primero que todo en los medios de cultivo.
segundo lugar las cepas control. Luego con relación al aseguramiento de los medios de cultivo…… Para que el organismo crezca, es necesario que la temperatura de incubación facilite el buen metabolismo del microorganismo a cultivar. Para ello requiere de: Una atmósfera adecuada (aerobio, microaerofílico, anaerobio)
Un tiempo pertinente, evitando el envejecimiento del medio y con ello de las cepas.
Una buena temperatura, para una adecuada curva de crecimiento. Según la ISO 11133:2009 Los Medios de cultivos se clasifican según: Los Medios de cultivos, son entonces específicos De:

La muestra que se analiza.

De los microorganismos a ser detectados. Los Medios de cultivos, pueden ser preparados… En el laboratorio a partir de sus diferentes componentes.
A partir de productos en polvo deshidratados comerciales o
Pueden adquirirse medios listos para su uso. Se puede tomar como base el documento
ISO 11133:2009 para: La preparación y esterilización de medios.
Tiempos de almacenamiento recomendados. Requisitos que deben especificarse y documentarse en los laboratorios de microbiología de los medio de cultivo provistos por el fabricante Los lotes de medios deben estar debidamente identificados.
Cada lote recibido debe ir acompañado de evidencias del cumplimiento de las especificaciones de calidad. El fabricante

en el momento de la entrega de medio de cultivo debe proveer información acerca de las especificaciones de calidad, como mínimo debe incluir lo siguiente:

* Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento.
* Fecha de vencimiento del medio.
* Condiciones de almacenamiento.
* Control de esterilidad.
* Control del crecimiento de los microorganismos de interés (target) y de los microorganismos no deseados (no target) y criterios de aceptabilidad.
* Controles físicos y criterios de aceptabilidad aplicados.
* Fecha de emisión de las especificaciones Según otras normas con fines de acreditación como por ejemplo la ISO 17025 o ISO 15189: 1. Debe existir un Procedimiento Documentado para preparación de medios de cultivo, diluyentes y reactivos.

2. Debe existir un Procedimiento Documentado de Almacenamiento de los medios de cultivo y diluyentes preparados 1. Debe existir un Procedimiento Documentado para preparación de medios de cultivo, diluyentes y reactivos, en donde se incluya: En el caso de Medios preparados por el laboratorio: Verificar (siempre que sea necesario) que los medios de cultivo y diluyentes preparados por el laboratorio tengan las características adecuadas con respecto a: CUANDO SE ESTERILICEN MEDIOS DE CULTIVO, TENGA PRESENTE QUE DEBE REALIZAR UN

Control de las pérdidas de volumen durante la esterilización: Debe verificarse que no haya pérdidas significativas de volumen de los diluyentes durante el proceso de esterilización en autoclave.
Este punto es especialmente importante en métodos cuantitativos. Para la evaluación de la pérdida de volumen de los diluyentes:

1. Colocar un volumen fijo de diluyente en tubos de ensayo o frascos de dilución.
2. Medir el peso o volumen antes y después del proceso de esterilización en autoclave.
3. Con los datos obtenidos, se efectúa el cálculo y la inferencia estadística. En el caso de Medios listos para su uso Se deben validar todos los medios y diluyentes que se suministren en una forma directamente utilizable o parcialmente completa antes de su utilización.

Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:

La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés

La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa.

Los atributos (por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas).

Parte de esa validación es provista por las especificaciones de calidad del proveedor, de ahí la importancia de la ficha técnica del medio de cultivo y de la solicitud del protocolo de evaluación del medio de cultivo o ficha de calidad del producto ADEMAS SEGÚN LA ISO 11133:2
EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DEBE REALIZAR UNA EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS REACTIVOS El laboratorio debe asegurarse que la calidad de los reactivos utilizados sea apropiada para los ensayos realizados.

Ejemplo: Reactivos usados para revelar pruebas bioquímicas

Que en el desarrollo de las pruebas de identificación se llevaron a cabo controles positivo y negativo utilizando microorganismos que sean trazables a colecciones de cultivos nacionales o internacionales reconocidas, es decir cepas de control (ATCC). Síntesis final

Énfasis a la calidad de los medios de cultivo.
La preparación y esterilización constituyen pasos críticos.
El fabricante debe proveer información acerca de las especificaciones de calidad.




* La preparación y esterilización de medios de cultivo y diluyentes

* La preparación de reactivos

* Control de calidad del agua destilada.

* Lavado de material

* Control de las pérdidas de volumen de los diluyentes. Cumpliendo con requisitos de calidad CONTROL DE CAL DAD ¿Qué necesita un microorganismo para crecer? * Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés.(Productividad)
* Inhibición o supresión de los microorganismos no deseados.(Selectividad)

* Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas)
* Propiedades físicas (por ejemplo, pH, volumen)
* Sea estéril. Establecer, criterios de validez El laboratorio debe contar con Procedimientos o Instructivos documentados e implementado para :
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