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Vectores de expresion

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by

maria del mar borrero ramirez

on 4 November 2013

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Transcript of Vectores de expresion

Vectores de expresión
vectores para plantas superiores
vectores para células animales
vectores comerciales

permite construir fusiones de genes
expresión del gen clonado para producir un producto (PP)
ESTO SE LOGRA CON
Promotor
Cassetes de expresión
genes reguladores
Características
Origen de replicación funcional
Mecanismo de Selección (Res. anti)
Promotor fuerte con control regulatorio
Sitio de restricción corriente abajo del promotor
Único sitio de restricción

Aplicaciones biotecnologicas
Usos
Transformación para generar:
Plantas transgénicas
Animales
Microbios
Vectores lanzadera
Transfiere genes entre especies no relacionadas (Procariota / Eucariota)
gram - / Streptomyces = huésped
Ori de ambas especies
marcador de ambas
polilynker
Eje: SV40
transformación en E.coli
Componentes
ARS: secuencia de replicacion autonoma
CEN: centromero de levadura
URA 3: síntesis de uracilo
Este vector presenta un promotor (GAL1) de expresión de genes de proteínas inducible por medio de galactosa y reprimible en presencia de glucosa.
Generalidades
La clonación de genes se da en E. coli:
Recombinación de la molecula se construye e introduce en la células huésped (planta)
Ti : inductor de tumores
Ri: inductor de raíces
Posee T- ADN : Regulación cto vegetal / se transfiere a la planta durante la infección = integrado del ADN nuclear
Características pTi
pTi se integra a la planta y es trasmitido a través de mitosis y meiosis
Genes de NOS son codificados por T-DNA que posee el promotor para plantas celulares
DNA extraño se inserta en la región T y es integrado en el genoma como parte del T-DNA
Agrobacterium tiene un amplio rango de hospederos por lo tanto el T-DNA puede ser transferido a varias plantas de cotiledoneas
Gen vir : movilización ADN bacteriano a la cll vegetal
Mapa genetico del plasmido
Ti
Mutante Ti
pGV3850
Plasmido Ri
Presente en A. rizogenes : raíces peludas
ADN 15O kb
mecanismo similar al del Ti
EXAMPLE
Los replicones análogos a los plasmidos bacterianos no se encuentran en células animales.
algunos virus se han desarrollado como vectores de las células animales.
los antígenos nucleares del virus Eipten Bar y el Ori P se mantienen en primates y caninos pero no en roedores.
Generalidades
SV40
Virus del simio 40 = tumores en el primate.
ADN ds- 5243 pb
virus con dos ciclo de vida:

Células permisivas (Mono)
:
ciclo lítico
Minicrosoma = amplificación del genoma viral durante la infección = vector --> introduce el ADN exógeno. expresión en el ciclo infeccioso


células no permisivas (ratas)
:
replicación viral bloqueada = transformación morfológica = integración en el genoma del huésped

Vector recombinante (RSV40)
Transferencia de genes:
fáciles de hacer
títulos 10 IU/mL
transforman células de células en reposo como en células que se dividen
expresión de transgenes en amplia gama de células
No inmunogenicos
Desventaja

Recombinación arbitraria
del genoma viral en el genoma
del huésped
Gen transfectado en celulas COS
Plasmido Ti
Adenovirus
DNA lineal 35 kb
acomoda sólo un 5% de ADN extra, utilizándolo como vector.

deleción de regiones del virus para dejar espacio y sustituirlas por el material exógeno.
ADN extraño = soporte = pp
Eficiente para obtención de ADN en células
infecta células reproductivas / cel diferenciales
no efectos mutagénicos
no se han descrito patologías graves asociadas al adenovirus salvaje
su toxicidad como vector es baja y su bioseguridad es alta
muy alta eficacia de transducción; expresan cantidades altas del transgén
Expresión de genes transitorio = ADN viral no se integra al ADN del huésped
Ventajoso para terapia génica
Construcción de vectores adenovirales
partículas virales no replicativas pero infectivas, y con capacidad para transferir el material génico terapéutico introducido en su genoma

Papiloma bovino
Vectores virales pox
Los Poxvirus como Vaccinia
ADN (187kb)
capacidad para grandes inserciones de hasta 35kb.
Genes de antígeno de superficie de una variedad de virus de ADN y ARN han sido expresados por virus de Vaccinia recombinantes
vacunas en estudio
Compañías que producen mejor calidad de vectores
Kit de preparación para clonación y expresión de genes
Vectores de expresión siARN inducibles
Vectores de expresión siARN plasmidicos
Vectores de expresión virales siRNA
Virus del papiloma bovino
enfermedad del ganado vacuno caracterizado por la presencia de papilomas y fibropapilomas
DNAds circular 8 kb
Replicación autónoma del virus (BPV-1)
vectores de expresión en células mamíferos (No humanos)
integragcion DNA vector/ genoma célula huesped = replicacion como elementos extracromosomicos
ARNsi = silenciamiento de genes
¿para que sirven?
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