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Tesis

Trabajo de investigación
by

Manuel Quezada

on 25 January 2013

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Transcript of Tesis

GRACIAS Autor: Manuel Quezada
Tutora: Liliana Naranjo INFLUENCIA DE LOS SOLVENTES EN EL DESARROLLO DEL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE AZITROMICINA EN COMPRIMIDOS UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA EL PROBLEMA
MARCO TEÓRICO
METODOLOGÍA
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES Capítulos Planteamiento del Problema
Formulación del Problema o Hipótesis
Objetivos
Justificación e importancia de la Investigación Reactivos Personal calificado Complicado
Costos
Mantenimiento Adecuado No Adecuado Validar Interactuar con los excipientes



Mala especificidad Método oficial Azitromicina HPLC Altos costos Dificultad Métodos Alternativos Espectrofotométricos Objetivo General
Determinar Influencia de los solventes Objetivos Específicos
Realizar Ensayos de laboratorio
Demostrar que el método cumple con parámetros de validación
Comparar con el método oficial
Establecer un análisis costo tiempo CLARITROMICINA Tesis 2008, Desarrollo y validación UV
210 nm



Interferencias con
excipientes Visible
481 nm



Método validado ESPECTROFOTOMETRÍA Tiene muchas aplicaciones en determinaciones cuantitativas Se basa en la medida de la absorbancia o transmitancia de una molécula Absorbancia Concentracion Ley de Beer CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
(HPLC) Fase móvil




Fase estacionaria Solventes


Relleno pelicular




Relleno de partícula porosa SOLVENTES Clasificación Polares



Apolares Próticos


Apróticos Solvatación AZITROMICINA Macrólido semisintético
Bacteriostático (inhibe la síntesis de proteínas)
Diferencia (nitrógeno en el anillo de la macrolactona) Farmacocinética Absorción


Distribución


Metabolismo


Eliminación Biodisponibilidad 37 %


Tejidos: Pulmón, amígdalas, próstata.
Cmáx = 0,33 microg/mL (día 1)
0,55 microg/mL (día 22) J Biodisponibilidad = 37%


Total Tejidos
Cmax = 0,33 microg/mL (1 día)
Cmáx = 0,55 microg/mL (día 22)

10 Metabolitos


Biliar Oral
Orina IV Formados por desaminación
hidroxilación Pulmón
Amígdalas
Próstata Datos requeridos para la validación TIPO DE INVESTIGACIÓN
POBLACIÓN Y MUESTRA: UNIVERSO DE ESTUDIO
DISEÑO EXPERIMENTAL
VARIABLES
TÉCNICAS E INSTRUMENTOS ANALÍTICOS Bibliográfica Experimental 2 LOTES Azitromicina Comprimidos






Placebo Comprimidos Primera


Segunda


Tercera Desarrollo del método
(Parámetros de desempeño)


Validación
ADEVA, Mínimos cuadrados


Comparación (HPLC)
t sorteada Independiente Dependiente Concentración de azitromicina Longitud de onda
Solvente Desarrollo del método analítico



Validación del método analítico



Comparación con el método en HPLC Selección del disolvente: (UV; Visible)
Selección de las longitud de onda
Intervalo óptimo de concentraciones Linealidad e intervalo
Precisión
Exactitud
Especificidad
Robustez
Incertidumbre Porcentaje de pureza en la muestra
Espectrofotómetro (10 tratamientos)
HPLC (8 tratamientos) Concentración UV Concentración Visible 50 mg Azitromicina


100 mL de disolvente


2 mL alícuota


50 mL disovente 20 microg/mL 40 microg/mL 80 mg Azitromicina


100 mL Disolvente


5 mL alícuota


50 mL (HCl 0,1 N)


25 mL Alícuota + H2SO4


50 mL (HCl 0,1 N) 200 - 400 nm 400 - 700 nm Intervalo óptimo de concentraciones 80 % 90% 100 % 110% 120% Regresión lineal por
Mínimos cuadrados
Coef. de correlación (r) Validación del método analítico Intervalo y linealidad Precisión Exactitud Especificidad y Robustez Intervalo óptimo de concentraciones Repetibilidad Reproducibilidad 1 Analista
1 Día
3 Repeticiones/Nivel 2 Analista
2 Días
3 Repeticiones/nivel 5 Niveles de concentración Porcentaje de recuperación Error Relativo ADEVA
CV Análisis estadístico No hay Interferencias con los excipientes
Filtrar la muestra t pareada Análisis Estadístico INCERTIDUMBRE (U) Fuentes U estándar


U combinada


U expandida Validación La validación es la confirmación que se da por la recopilación y análisis de la evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares para el uso específico propuesto, sea esto para un método, equipo o proceso. ASEGURAR QUE LOS DATOS OBTENIDOS DE UN ANÁLISIS O PROCESO SON CONFIABLES Barrido espectral en la Región UV Barrido espectral en la región Visible Selección de la Longitud de Onda Longitud de Onda Máxima INTERVALO ÓPTIMO DE CONCENTRACIONES Y LINEALIDAD Pendiente
Intercepto



Correlación (r) Mínimos cuadrados Test de Hipótesis
Ho = No hay Correlación
Ha = Si hay Correlación Si la t exp < t tab se acepta la Ho
Si la t exp > t tab se acepta la Ha Datos para la validación 2 Analista
2 Días
3 Repeticiones
5 Niveles VALIDACIÓN -LINEALIDAD Test de Hipótesis
Ho = No hay Correlación
Ha = Si hay Correlación Si la t exp < t tab se acepta la Ho
Si la t exp > t tab se acepta la Ha Precisión A=Analista
D=Día
C=Concentración La ICH recomienda que el CVr no sea mayor al 2 % Repetibilidad Precision La ICH recomienda que el CVR no supere el 2% Reproducibilidad Exactitud El criterio de aceptación del porcentaje de recuperación es del 98 – 102% INCERTIDUMBRE Material de referencia

Material Volumétrico

Balanza

Espectrofotómetro

Operario Principales fuentes Certificado de análisis

Apreciación del material

Sensibilidad de la balanza

Sensibilidad, Factor respuesta

Coef. Variación (CVr) Pureza=97,5%±4,25% UstMR=0,02454 mg INCERTIDUMBRE DEL MATERIAL VOLUMÉTRICO INCERTIDUMBRE DE LA BALANZA INCERTIDUMBRE DEL ESPECTROFOTÓMETRO INCERTIDUMBRE DEL OPERADOR Incertidumbre Combinada Incertidumbre Expandida La incertidumbre expandida es la incertidumbre del método y según la ICH el valor no tiene que ser mayor al 30% ESPECIFICIDAD No hay interferencias con los excipientes Robustez La t(calc) es mayor a la t(tab) por lo que sí existe diferencia significativa en la muestra filtrada y sin filtrar debido a la presencia de los excipientes Cromatograma de Azitromicina se muestra el tiempo de retencion. COMPARACIÓN CON EL MÉTODO DE HPLC Y ESPECTROFOTOMÉTRICO Concentraciones de azitromicina en los comprimidos por HPLC Concentraciones de azitromicina en los comprimidos (espectrofotómetro) La t(exp) es menor que la t(tab), lo que quiere decir que, con una probabilidad del 95%, no hay diferencia significativa entre los dos métodos. Análisis Costo - Tiempo La azitromicina es soluble en todos los solventes.
Región UV, Absorción con etanol e isobutanol, no es especifico.
Región Visible, Absorción en los solventes de prueba, método específico, (5 mL Metanol, diluyente HCl 0,1N). Parámetros de validación
1) Linealidad.- Minimos cuadrados, coef. de correlación (0,995); experimental (0,9986)
2) Exactitud.- dentro de la especificación (98 - 102%)
3) Precisión.- DCA - ADEVA, CVr y CVR no mayor al 2% si se cumple.
4) Incertidumbre.- En cada nivel no es mayor al 30%, si cumple con la especificación
5) Robustez.- Es necesario filtrar la muestra
6) Especificidad.- No hay interferencias CONCLUSIONES No hay diferencia significativa entre los dos métodos, por lo tanto el método espectrofotométrico es una alternativa para la cuantificación de azitromicina en comprimidos Los parámetros de desempeño del método son:
Longitud de onda (481 nm)
Intervalo de concentración (32,00 - 48,00 ppm)
Solvente: metanol (5 mL)
Diluyente: Ácido clorhídrico 0,1 N.
Formador del cromógeno: Ácido sulfúrico
Tiempo de reacción: 75 minutos Análisis Costo-Tiempo
El método en HPLC es más caro que el método espectrofotométrico y que el tiempo de análisis de azitromicina por el método de HPLC es más rápido que el método espectrofotométrico Las lecturas tienen que realizarse a los 75 ± 5 minutos por pérdida de la absorbancia del cromógeno Se puede utilizar este trabajo como guía para desarrollar métodos espectrofotométricos para moléculas que tengan características similares a los antibióticos macrólidos. Es recomendable utilizar instrumentos y equipo de laboratorio que estén calificados y calibrados, los reactivos utilizados deben ser para análisis, para garantiza la confiabilidad de los datos. Si existiera algún cambio significativo en el método se debe validar nuevamente. Este método solo aplica en comprimidos de azitromicina, si se desea aplicar este método a otras formas farmacéuticas se recomienda verificar la validez del mismo, y comprobar que no exista interferencias con los excipientes. RECOMENDACIONES la incertidumbre nos da una idea de la calidad del resultado ya que nos muestra un intervalo alrededor del valor estimado dentro del cual se encuentra el valor considerado verdadero. INCERTIDUMBRE Estrategias para el cálculo de incertidumbre Propuesta por la ISO
Propuesta por el Comité de métodos analíticos
Utilizando la información de la validación
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