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aislamiento y obtencion de biofertilizante

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mario gabriel lopez espejo

on 3 December 2013

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Transcript of aislamiento y obtencion de biofertilizante

Obtencion de biofertilizante a partir de acetobacter
Hola! Sabes lo que es un biofertilizante?
Primero debemos diferenciar entre abono y fertilizante
Los fertilizantes son nutrientes de origen mineral y creados por la mano del hombre, los abonos son creados por la naturaleza y pueden ser de origen vegetal, animal o mixtos.
Un bio fertilizante es un ABONO ORGÁNICO
Abono orgánico son sustancias fertilizantes procedentes de residuos humanos, animales o vegetales que aportan a las plantas elementos nutrientes indispensables para su desarrollo mejorando la fertilidad del suelo.
BACTERIAS FIJADORAS DE NITRÓGENO
Se desarrollan de forma natural en el suelo, se conocen desde hace más de un siglo. Representan un biofertilizante ecológico y se
dividen en dos grandes grupos:
Las simbióticas, especificas de las leguminosas, como el Rhizobium, y las libres, que viven en el suelo y no necesitan la planta para su
reproducción, como el Azotobacter y el Azospirillum, entre los más importantes en agricultura.

Ventajas de las bacterias fijadoras
-Producen fitohormonas, como el ácido indolacètico y las citoquininas, capaces de
acelerar y potenciar el crecimiento de las plantas.
-Al permanecer vivas durante años y reproducirse en el suelo, no sólo no lo degradan
sino que contribuyen a su enriquecimiento en nitrógeno y a su regeneración de forma
ecológica y gradual, incluso en terrenos de alta concentración salina.
Se ha comprobado que fertilizando los cultivos con estas bacterias y con nitrógeno
químico en un porcentaje entre el 20 y 50% del utilizado normalmente, se consigue un
aumento de producción sobre las cosechas obtenidas únicamente con fertilizante
químico al 100%. Esto es debido a que, al liberarse la bacteria de su función fijadora de
nitrógeno, produce más factores de crecimiento vegetal, En cereales de secano, esto
puede suponer el ahorro del abonado de cobertera.
-Crea una barrera protectora contra hongos y bacterias patógenas en la raíz de la
planta, por lo que ésta crece más sana y fortalecida.
-Producen enzimas que solubilizan los fosfatos y los hacen más accesibles a la
planta, así como factores que facilitan la absorción de oligoelementos.
-Se ha demostrado que resisten mejor las condiciones de sequía y los climas áridos
ya que se forman alginatos en las raíces de las plantas.
-Como consecuencia de todo lo anterior, es un mayor desarrollo de las raíces de las
plantas, con el consiguiente beneficio general para ésta, así como el peso de los frutos.
-También se ha comprobado un mayor índice de germinación de semillas comparada con otros sistemas de abonado
Las nuevas estirpes de Azotobacter y Azospirillum son capaces de fijar un 72,64%
más de nitrógeno atmosférico, que las estirpes originales.
Hay pues un cúmulo de ventajas para el usuario, económicas, ecológicas, A corto,
medio y largo plazo en la progresiva sustitución de la fertilización química por las
bacterias naturales, totalmente inofensivas para el medio y el ser humano.
Azotobacter como bacteria fijadora
Fija nitrógeno en presencia de oxígeno por tres sistemas diferentes de nitrogenasa.
-Posee mecanismos de protección de la nitrogenasa
-alta capacidad respiratoria que en condiciones diazotróficas o de fijación de nitrógeno es hasta 10 veces más alta que la de Escherichia coli.
-. Produce dos polímeros de uso industrial: el polisacárido extracelular alginato y el poliéster intracelular polihídroxibutirato.
-Sufre un proceso de diferenciación morfológica para formar quistes resistentes a la desecación.
Las bacterias del género Azotobacter, las cuales son Eubacterias Gram-negativas que tienen una pared celular compleja que consiste de una membrana externa y una capa interna de peptidoglicano que contiene ácido murámico y mureína. Se reproducen por fisión binaria, viven en suelos y en aguas frescas, son células ovoides y grandes de 1.5 a 2.0 μm de diámetro. Son pleomórficas, variando su morfología desde bacilos hasta células en forma de cocos.
Son quimioorganotróficas, utilizan azúcares, alcoholes y sales inorgánicas para crecer. Son fijadores de nitrógeno; en vida libre fijan al menos 10 mg de N2 por gramo de carbohidrato (glucosa) consumido. Requieren molibdeno para fijar nitrógeno que puede ser parcialmente reemplazado por vanadio. Utilizan nitrato y sales de amonio y ciertos aminoácidos como fuentes de nitrógeno. Son catalasa positivos.
El rango de pH en el que crecen en presencia de nitrógeno combinado es 4.8-8.5 el pH óptimo para crecer cuando fijan nitrógeno es 7.0-7.5.una bacteria poliploide, es decir posee varias copias de su cromosoma, se calcula que pueden tener hasta 80 copias. El número de copias varía dependiendo del medio y las condiciones de cultivo así como de la fase de crecimiento. Es de tamaño muy grande de 2x5 nm de diámetro es decir de 5 a10 veces el volumen de E. coli. Se ha asociado el tamaño con la poliploidía
Obtencion del preinoculo
Para la preparación del pre inoculó se toman en cuenta los siguientes requisitos:

1.- El cultivo debe estar metabólicamente activo y libre de contaminantes. Para ello se trabaja bajo normas estrictas de esterilidad y se realiza un control permanente de cultivo mediante la observación directa al microscopio de las características del microorganismo utilizando técnicas microbiológicas.

2.- El inoculo debe estar en su fase exponencial (grado máximo de desarrollo). Para ello se evalúa el crecimiento bacteriano durante 30 horas que es el tiempo estimado que tarda en alcanzar la fase exponencial. Se procura obtener preinóculos con una concentración de biomasa del orden de 108-109 células/ml.

3.- Se debe disponer de una cantidad de cultivo suficiente para inocular el volumen de medio liquido a utilizar en la fermentación, el cual debe estar entre el 3 – 10 % del volumen total a fermentar.

Analisis proteinico
Concluiones y recomendaciones
Conclusiones:
Logre aislar las cepas de bacterias Azotobacter spp obtenidas de una plantación de papa de la facultad de agronomia en Cota Cota
-No logre identificar o caracterizar que bacteria especificamente era la que he aislado, pero se que es alguna del genero azotobacter
-Despues del aislamiento no realice la preservacion criovial, si no que solo procedi directo a la formacion del inoculo y posterior inoculacion a las mismas tierras recolectadas de la cual se realizo el aislamiento.
-Pude observar que en mis muestras de tierra, hubo mayor desarrollo de bacterias azotobacter en aquella que era de tierra sin fertilizar, y no asi en la de la tierra fertilizada.
-De acuerdo al punto anterior podemos decir que la bacteria no se desarrolla en medios muy basicos
Reconendaciones:
-Seria bueno que doña maria tenga un ayudante o asistente, ya que veo que no puede abasteserce sola, o tener un encargado mas en laboratorio, ya que en el momento que tiene doña maria para almorzar, no podemos ser atendidos, entonces no cumple con su rol ni su horario. Creo talves seria lo correcto que hayan dos turnos como en el principe.
-Tener casilleros propios o mas gavetas por grupo en las instalaciones del ideproc en Cota Cota (tuve la mala experiencia de que como todos los materiales estaban juntos o todos lo guardabamos juntos, alguien entre su descuido quebro mi vidrio reloj, usaron mi pipeta para un líquido el cual no sale, viéndome obligado a reponer los mismos) asi cada quien seria en verdad responsable del uso de su propio material

Procedimiento
Luego tomamos el Ph
de cada muestra.
-tamisamos yluego llevamos al aislamiento primario de nuestra bacteria
Previamente muestreamos el
suelo
El primario lo realizamos con la muestra tamizada

El secundario con la recuperacion de la bacteria que crecio en el aislamiento primario
Llevamos al aislamiento primario y secundario. En agar ashby
en ambos casos incubamos a 27ºC por 7 dias
Fermentación discontinua
Mi forma en la preparacion del preinoculo y posterior inoculacion no fue la misma que se indica en el procedimiento, lo realice de forma empirica y en parte de acuerdo a criterio propio y suposiciones
no logre comprobar cual era el nivel proteinico al inicio y al final de mi experimentacion, a falta del centrifugador
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