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Unidad 1. Métodos neurobiológicos

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Magally Vázquez

on 25 August 2014

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Transcript of Unidad 1. Métodos neurobiológicos

Unidad 1. Métodos neurobiológicos
Ablación Experimental
Métodos Histológicos
Métodos Neuroquímicos
Ablación Experimental o Método Lesivo
•Uno de los principales métodos de investigación, el más antiguo de ellos, utilizado para estudiar las funciones cerebrales.
•Consiste en la destrucción de una parte del encéfalo, para posteriormente estudiar la conducta del animal.
•Se deduce que las funciones que el animal ya no puede ejecutar, después de la ablación, son las que controlaba la parte destruida.
Lesiones cerebrales de regiones subcorticales.
Localizadas debajo de la corteza.
Realizadas mediante un método estereotáxico, que consiste en la utilización de un aparato estereotáxico, que por una parte inmoviliza la cabeza del animal, y mediante un brazo desplaza el electrodo o la cánula, dependiendo del tipo de lesión.
Métodos histológicos
Para verificar la localización exacta del daño del tejido cerebral, se realiza este procedimiento, que consiste en fijar, seccionar, teñir y examinar el encéfalo.
A continuación se presenta un video con los pasos de este método:
Tinciones
Son sustancias, por lo regular de nitrato de plata y el bicromato de potasio, utilizadas en la técnica y funcionan como colorantes y fijadores.
Con esto se observan neuronas, células glía, y vasos que se verán de color negro sobre un fondo amarillo como acrílico.
Esta técnica nos permite observar la morfología de las neuronas en tres dimensiones.
Inmunohistoquímica.
Manera de marcar las vías que siguen los axones en su comunicación intercelular.
Basado en la función de las lecitinas, proteínas que son producidas por plantas y que se adhieren a unas moléculas complejas que existen en el sistema inmunitario.
¿Qué son?
Son procesos que determinan la localización de una enorme variedad de sustancias en el encéfalo.
Con ellos se pueden identificar las neuronas que segregan un neurotransmisor o un neuromodulador determinado, y aquellas que tienen receptores que responden a la presencia de estas sustancias.
Métodos
Localización de neurotransmisores y de receptores en el cerebro
Consiste en la localización en el cerebro de un determinado neurotransmisor o de un receptor que constituye un paso clave en el intento de comprender su función psicológica.

Se realiza por medio de dos técnicas:
Son las técnicas que permiten estudiar y manipular el tejido cerebral in vivo o una vez que el espécimen ha muerto.
Para medir la actividad química cerebral
PHA-I: lecitina específica producida por la judía, la cual se emplea particularmente para identificar los axones aferente.
Este procedimiento se realiza inyectando una mínima cantidad de PHA-L por medio de un aparato de estereotáxia, las moléculas empiezan a ser captadas por las dendritas y comienzan a trasladarse siguiendo la comunicación de las neuronas, en poco tiempo las moléculas de PHA-L estarán en todas las neuronas. Entonces se realiza los cortes del cerebro para ampliar la técnica de inmunohistología para poder examinar con un microscopio.
Impregnaciones argénticas
(técnica de Golgi)
Existen 3 Métodos:
Vías de administración de fármacos

Lesiones químicas selectivas

Medida de la actividad química del cerebro
Vías de administración de fármacos

Se inyectan fármacos en pequeñas cantidades a través de una aguja (cánula), que se haya implantado de forma estereotáxica en el cerebro.

Lesiones químicas selectivas

Se realiza una micro inyección de neurotoxinas (venenos neurales) con afinidad, por determinados componentes del sistema, destruyendo esas neuronas y dejando ilesas a otras que atraviesan la misma región cerebral.
Ejemplos de neurotoxinas: el ácido kaínico y el ácido iboténico, b-hidroxidopamina (6-OHDA). Está última es absorbida únicamente por las neuronas que liberan los neurotransmisores norepinefrina o dopamina.


Existen tres tipos:


• La técnica de la 2- desoxiglucosa,

• La técnica de la diálisis cerebral y
• La electroquímica 138 LO
Técnica de la
2- desoxiglucosa
Se inyecta 2-DG -azúcar que penetra en las células junto con la glucosa pero que no se metaboliza-, pero radioctiva. El investigador sacrifica al animal y secciona su cerebro para someterlo a una autorradiografía, procedimiento que localiza sustancias radioactivas en una sección de tejido.
Técnica de la diálisis cerebral
Método para medir la concentración extracelular de sustancias neuroquímicas en animales vivos en acción.
Consiste en el implante cerebral de un tubo fino provisto de una sección corta semipermeable, las sustancias químicas extracelulares presentes en la estructura se difunden en el interior del tubo pafra ser recuperadas y analizadas.
Electroquímica 138 LO
Registra la concentración extracelular de sustancias neuroquímicas de animales inmersos en algún comportamiento.

Inmunocitoquímica

Procedimiento para la localización de determinadas proteínas en el cerebro por medio del mareaje radiactivo o con un tinte y la posterior exposición de las secciones de tejido cerebral a los anticuerpos marcados.

Hibridación
in situ

Se sintetizan las moléculas que se unen al ARNm que dirige la síntesis de la proteína de interés; a continuación, estos
ligandos
son marcados y las secciones cerebrales expuestas a ellos.
Bibliografía
Impregnación argentica de Gogi que deja ver las ramificaciones dendríticas.
Pinel, J. P. (2001). Lo que hacen los biopsicólogos: métodos de investigación de la biopsicología. En P. Pinel (Ed.), Biopsicología (pp. 121-156). Madrid: Prentice Hall.
Carlson, R. N. (2006). Métodos y estrategias de investigación. En N. Carlson (Ed.), Fisiología de la conducta (pp. 137-169). Barcelona: Editorial Ariel.
Para el estudio de la neuroanatomía, se requieren de tinciones histológicas que permitan la observación adecuada a través del microscopio.
La tinción de los somas celulares es empleada para verificar la ubicación de lesiones cerebrales (por ejemplo, el tinte azul metileno, capta la sustancia de Nissl; además de este, existen muchos otros tintes que identifican sustancias específicas).
Modulo 0203. Métodos de evaluación en las neurociencias del comportamiento.
Grupo 9235. Equipo 1:
Castellanos Pérez Guadalupe
Ramírez García Miguel Angel
Vargas Pereda Roxana
Vázquez Badillo Magally María



Lesión por radiofrecuencia (RF)
Consiste en la transmisión de corriente de radiofrecuencias a través de un electrodo, el paso de la corriente genera una temperatura alta, que es la que causa la destrucción en las zonas cercanas a la punta del electrodo.
Destruye somas neuronales y los axones de las neuronas que atraviesan la región.
Lesiones excitotóxicas
Se realizan mediante la inyección intracerebral de un aminoácido exitatorio que destruye los somas celulares vecinos, respetando a los axones de las distintas neuronas que pasan por la zona, por lo cual son lesiones selectivas.
Permite determinar si los efectos comportamentales de la destrucción de una estructura cerebral concreta, se deben a la muerte de las neuronas ahí localizadas o bien a la lesión de los axones de paso.
Lesión exitotóxica por ácido caínico
Estimula los receptores glutamatérgicos, por lo cual estimula a las neuronas hasta que éstas mueren.
Lesión exitotóxica por 6-hidroxidopamina (6-HD)
Lesión más específica, ya que la 6-HD es captada por los transportadores de moléculas de los axones y botones terminales de neuronas dopaminérgicas y noradrenpérgicas, intoxicándolas hasta su destrucción.
Se utiliza en determinadas regiones del encéfalo a fin de destruir poblaciones específicas de las neuronas mencionadas.
Lesiones falsas
Causadas sin la utilización de radiofrecuencias o aminoácidos exitatorios.
Se reproduce en otros animales el proceso, dado que cuando se producen lesiones subcorticales, se producen daños adicionales.
El grupo de animales con lesiones falsas se constituye en grupo de referencia para observar y comparar la conducta de los que si fueron dañados
Lesiones reversibles
Propósito: impedir de manera temporal la actividad de una determinada región del encéfalo.
Realización:
Mediante la utilización de muscimol o un anestésico que bloquea los potenciales de acción en los axones de la región.
Otra forma es mediante el enfriamiento de tejido nervioso, mediante la utilización de un instrumento llamado criodo, que se implanta entre el cráneo y la superficie del encéfalo, a través de los tubos de acero inoxidable con que cuenta, se hace circular un líquido enfriado.
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