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INMUNOHISTOQUÍMICA

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Francisca Castillo Ortega

on 27 November 2012

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Transcript of INMUNOHISTOQUÍMICA

La Inmunohistoquímica une tres disciplinas: inmunología, histología y química.

El concepto fundamental de la IHQ es la identificación de un constituyente tisular (antígeno) in situ por medio de un anticuerpo especifico.

La reacción es visible sólo si el anticuerpo está marcado con una enzima que transforma un sustrato incoloro en coloreado y precipita en el lugar de la formación del complejo antígeno-anticuerpo Albert H Coons, Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier (1941) Desarrollaron la metodología de anticuerpos marcados con fluoresceína (inmunofluorescencia indirecta)
Antígenos
Proteínas tisulares
Complejos inmunitarios
Localización de antígenos virales
Antígenos tumorales Pasos: 1. Sección del tejido Inmunohistoquímica directa Inmunohistoquímica indirecta Pasos 1. Obtención del tejido
Tejido debe ser preservado rápidamente para evitar perder su arquitectura y descomposición de proteínas celulares. (fijar)

2. Todos los pasos previos a la incubación del anticuerpo primario.
Desparafinar e hidratar las secciones de tejido, bloqueo de enlaces no específicos y de actividades endógenas (Peroxidasa, fosfatasa, biotina) y la recuperación de antígenos Aplicaciones Diferenciación de tipos celulares (neoplasias)

Valoración pronostica de ciertos tumores (marcadores progresivos)

Identificación de agentes infecciosos.

Proteínas, lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos Anticuerpos disponibles CEA (antígeno carcinoembrionario): proteína que expresan muchos adenocarcinomas (pulmón, páncreas, vías biliares, gastrointestinales, endometriales.
DES (desmina): proteína presente en células musculares lisas, estriadas y cardíacas, útil en la identificación de leiomiosarcomas y rabdomiosarcomas.
MIB-1 / Ki-67: proteína intranuclear que participa en en el ciclo celular. Su presencia e intensidad dan idea del índice de proliferación de una neoplasia maligna y tiene, por tanto, utilidad pronóstica. Primera técnica inmunohistoquímica Tipos de anticuerpos utilizados: Policlonales: Contienen una mezcla de inmunoglobulinas, secretados en contra de un antígeno específico, cada uno reconociendo diferentes epítopes.
3. Incluye todas las reacciones inmunológicas entre el anticuerpo primario y el antígeno del tejido
Incubación del anticuerpo primario, secundario y alguna reacción química adicional necesaria para ligar la molécula informadora "label" (peroxidasa o fosfatasa alcalina) al complejo inmune preformado

4. Todos los procedimientos necesarios para la visualización de la unión antígeno-anticuerpo.
Esto se consigue con una reacción química, en donde antígeno-anticuerpo reacciona con un sustrato y un cromógeno para producir una reacción coloreada

5. Interpretación de los resultados Inmunohistoquimíca utilizando un anticuerpo monoclonal contra Bacillus anthracis Inmunohistoquímica Francisca castillo
Valdivia, 2012 Universidad Austral de Chile
Facultad de Ciencias Veterinarias
Departamento de Patología Ki-67 marcador de índice de proliferación celular.
Células positivas en un Mastocitoma canino. Detección inmunohistoquímica del antígeno del virus del síndrome respiratorio y reproductivo (vPRRS) en cerdos Anticuerpo monoclonal SDOW-17 Pulmón. Macrófagos alveolares inmunoteñidos con anticuerpo SDOW-17. Cerdo sacrificado 14 dpi. Complejo ABC, contrateñido con hematoxilina Monoclonales: Son anticuerpos idénticos, son producidos por un solo tipo de célula del sistema inmune, específico para un epítope de un antígeno Diagnóstico de Piscirickettsia salmonis Salmón del Atlántico (Salmo salar), hígado (inmunohistoquímica específica para Piscirickettsia salmonis, 1000 X). Se observa una presencia de estructuras cocoides fuertemente positivas (color café), en vacuolas intracitoplasmáticas (flechas rojas) Testículo de un perro con tumor de las células de sertoli.
Las células neoplásicas tienen una tinción nuclear fuerte para GATA-3 Ramos-Vara y col 2008 Quezada y col (2004) Citopatveterinaria www.marcosgodoy.com Ramos-Vara y col (2008)
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