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Bromelina del fruto

tesis
by

Diana Coello Montoya

on 28 February 2014

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Transcript of Bromelina del fruto

Resultados
Actividad enzimática
Experimentación
Materia prima:
Procedimiento:
Resultados
Características físico-químicas
"Comparación de la concentración y actividad enzimática de la bromelina obtenida a partir de la pulpa de la piña (Ananas comosus) variedad Perolera de dos grados de madurez"
Conclusiones
Presentada por:
Diana Coello
Juleen Hidalgo

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL
Facultad de Ingeniería en Mecánica y Ciencias de la Producción
Gracias!!!
Características
Mecanismo
Aplicaciones
PIÑA
Bromelina de la fruta
Las endopeptidasas de la piña:
Ananina
Comasina
Bromelina del tallo
Bromelina de la fruta
Endopeptidasas
ENZIMAS DE LA PIÑA
Estructura de la
Bromelina
¿Tiene diferencia significativa la concentración y actividad enzimática de la bromelina extraída de la pulpa de la piña (Ananas comosus), variedad perolera con dos grados de madurez, cultivada en el Ecuador ?
La concentración y la actividad de la enzima bromelina extraída de la pulpa de la piña (Ananas comosus) variedad Perolera, se ve afectada por el estado fisiológico de la piña.
Comparar la concentración y actividad enzimática de la bromelina extraída de la pulpa de la piña (Ananas comosus) con dos diferentes grados de madurez, con el objetivo de proponer el mejor grado de madurez para la extracción de la enzima a nivel comercial.
Planteamiento del
Problema
Hipótesis
Objetivo
Inician la digestión de las proteínas al hidrolizar las uniones internas de las cadenas polipeptídicas dando como resultados nuevos residuos N y C-terminales, que llegan a ser los sustratos para las exopeptidadas.
Propiedades
Nomenclatura enzimática: EC 3.4.22.33
Cadena target del fruto: Phe-Val-Arg-|-NHMe
Cadena target del tallo: Arg-Arg-|-NHMe
Esquema representativo de la interacción enzima-sustrato para los subsitios del sitio activo de una peptidasa
Mecanismo catalítico
de las cisteín-proteasas
Equipos:
Centrífuga
Espectrofotómetro
Baño María
Micro Centrífuga
Liofilizador
Vórtex
Con un 95% de confianza se evidenció que existe diferencia significativa entre la concentración de la bromelina extraída de la pulpa de la piña de 12 y 18 meses de maduración, teniendo valores de 0.14±0.038 y 0.2±0.016 mg/ml de enzima correspondientemente, observándose mayor concentración en la piña más madura, debido a su desarrollo fisiológico en el que aumenta la síntesis de sustancias dentro de su composición, entre ella la enzima.
Existe suficiente evidencia estadística para concluir que la actividad enzimática de la bromelina de la piña de 12 meses es mayor a la actividad que presentó la de 18 meses, con los valores 24.23±7.63 y 13.00±3.18 TU/ml respectivamente, notándose así que al aumentar el estado fisiológico de la fruta disminuye su actividad, debido a que se sintetizan sustancias inhibidoras como el ácido fítico y tanino.
El sistema bifásico acuoso permitió la recuperación de la actividad enzimática en promedio de 30.21% y un índice de purificación de 2.16, con lo que podemos concluir que efectivamente existió una purificación enzimática, por lo cual se trabajó con los valores de actividad y concentración enzimática del extracto purificado para la determinación de las diferencias entre los grupos.
Se determinó que el mejor estadio de madurez para la extracción y purificación de la enzima es el de 12 meses, debido a que presenta una actividad específica de 184.61 TU/mg, superior a la de 18 meses de 64.99 TU/mg, tomándose en cuenta este valor debido a que representa el índice de pureza de la enzima, al relacionar la actividad y la concentración enzimática.
La madurez de la piña variedad perolera ejerce un efecto sobre la concentración y la actividad enzimática encontrándose que, al aumentar la madurez aumenta la concentración y sin embargo disminuye la actividad de la bromelina de la fruta.
Se recomienda estudiar la composición de la piña en diferentes periodos de tiempo para determinar los posibles inhibidores de la actividad enzimática de la bromelina, generados durante el desarrollo fisiológico de la fruta.
Método de purificación enzimática
Liofilización
Sistema Bifásico Acuoso
Concentración proteica
Estadio de mejor actividad proteolítica
Método de extracción enzimática
Piñas de 18 meses de maduración
Piñas de 12 meses de maduración
Recomendaciones
Se recomienda un estudio de distintos métodos de extracción para determinar el método de mayor índice de recuperación enzimática, además de un estudio del método de purificación enzimático con diferentes pesos moleculares del polietilenglicol.
Se recomienda un estudio comparativo entre posibles métodos de conservación de la enzima, para determinar si se puede conservar un porcentaje mayor de la actividad enzimática.
Relación de la Concentración y Actividad enzimática vs. Madurez
Heinicke & Gortner
Caygill & Etherington
Relación de la Actividad específica vs. Madurez
Comparación de las Actividades enzimáticas
24.23 TU/ml
18.29 TU/ml
16.66 TU/ml
FP: 30.21%
31.24%
Heinicke & Gortner
Teoría de la relación Concentración enzimática - Estado de madurez
Caygill & Etheringyton
Teoría de la relación Actividad enzimática - Estado de madurez
Concentración
Madurez
Madurez
Actividad
Desarrollo de la Investigación
Aspectos Generales
Experimentación
Resultados
Conclusiones y Recomendaciones
Buffer de extracción:
- Fosfato
- Cisteína
- EDTA
pH: 7
Centrifugación:
- 8000 rpm
- 4 °C
- 30 min.
PEG 8000 18%
Fosfato 16%
Enzima 20%
Agua 46%
Centrifugación:
- 8000 rpm
- 10 min.
(meses)
184.61 TU/mg
64.99 TU/mg
0.14 mg/ml
0.2 mg/ml
24.23 TU/ml
13.0 TU/ml
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