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Obtención de Ac Monoclonales y Policlonales

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by SUSAN CALFUNAO C on 15 October 2012

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Transcript of Obtención de Ac Monoclonales y Policlonales

Obtención de
Ac Monoclonales
y Policlonales ANTICUERPOS MONOCLONALES HIBRIDOMA -Glucoproteínas especializadas
que reaccionan en un lugar del Ag.

-Su producción radica en la creación
de hibridomas. Capacidad de células plasmáticas o linfocitos B para producir anticuerpos específicos “Inmortalidad” de una célula neoplásica de Mieloma. 1. Inoculación de un antígeno a un ratón. 2. Aislamiento de células plasmáticas del bazo. 3. Fusión de una célula de mieloma con una linfocito B = HIBRIDOMA. 4. Aislamiento y cultivo del hibridoma con evaluación de la presencia de anticuerpos. 5. Diferenciación de las células híbridas para formar células plasmáticas productoras de anticuerpos. 6. Expansión clonal. 7. Expansión de los hibridomas que interesan. 8. Purificación de los anticuerpos monoclonales. VENTAJAS
Alta homogeneidad
Ausencia de anticuerpos inespecíficos.
Facilidad de caracterización
Ausencia de variabilidad de lote a lote APLICACIONES
Mediciones de niveles de proteínas y drogas presentes en el suero.
Tipificación de tejidos y sangre. ANTICUERPOS POLICLONALES Producidos por diferentes células plasmáticas
( distintos clones de linfocitos B activados).
Reaccionan con varios epitopes sobre el Ag por lo tanto, reconocen con mayor o menor especificidad cada uno de ellos.
Animal mas frecuentemente utilizado es el conejo, cabra, cerdo, oveja, caballo, entre otros. 1.Se inyecta el Ag por vía intradérmica o subcutánea. En conejos, se usan volúmenes de 0.1- 0.5 ml en forma intradérmica en distintos sitios. 2. Las inyecciones potenciadoras son producidas una vez al mes o cuando se note un descenso en la cantidad de Ac. 3. La sangre es recolectada de la oreja del conejo o a nivel del peritoneo o corazón en el caso del ratón. 4. Luego de retirar las células sanguíneas, se podrán obtener los Ac policlonales en forma de antisuero estabilizado o fracciones de Ig con distintos grados de pureza.

5. Se realiza una precipitación por medio de sales ( Sulfato de amoniaco) , seguida por la cromatografía de intercambio de iones, sirve para retirar la mayor parte de otras proteínas del suero y aumentar pureza del Ac. 6. La cromatografía por afinidad puede usarse para aislar los Ac –Ag específicos y de esta manera librarlos de reacciones cruzadas
Enfermedades bacterianas como: el C. tetanis (tétano) H. Influenzae.
Enfermedades Virales: Citomegalovirus, Hepatitis A y B, Sarampión
Para la producción de reactivos de diagnóstico aplicables a Métodos de Enzimoinmunoensayo (ELISA).
Western Blot
Inmunofluorescencia UTILIDAD ANTICUERPOS MONOCLONALES ANTICUERPOS POLICLONALES Generación costosa Homogeneidad Sensibles y específicos Generación rápida Heterogeneidad Estables y especificidad variable COMPARACIÓN Presentación: Anticuerpo monoclonal de ratón de sobrenadante diluido en una solución salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, de base proteínica y preservado con azida sódica.
Usos: La oncoproteína c-erbB-2 es parte de la familia de los receptores del factor epidermal de crecimiento. Estos receptores son sobreexpresados en varios adenocarcinomas incluyendo aquellos del tracto gastrointestinal, ovario, y hasta en un 30% de los adenocarcinomas de mama.
Control: Carcinoma de Mama
Visualización: Membranal
Isotipo: IgG1 HER-2/NEU (C-ERB-B2) Ki 67 (SP6) Presentación: Anti-Ki-67 es un anticuerpo monoclonal de conejo producido en cultivo celular, diluído en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: El antígeno Ki-67 es una proteína nuclear no histónica que está presente en todas los fases del ciclo celular excepto G0. En general, Ki-67 es un buen marcador de poblaciones de células proliferantes.
Control: Astrocytoma, carcinoma de mama, carcinoma del colon, amígadala
Visualización: Nuclear
Isotipo: IgG TTF-1 (8G7G3/1) Presentación: Anti-TTF-1 es un anticuerpo monoclonal de ratón de sobrenadante diluido en una solución salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, de base proteínica y preservado con azida sódica.
Usos : útil en la diferenciación de adenocarinoma primario de pulmón de carcinoma metastásico de mama, y mesotelioma maligno. También puede ser usado para diferenciar carcinoma de células pequeñas del pulmón de inflitrados linfoides.
Control: Adenocarcinoma de pulmón, pulmón normal, tiroides
Visualización: Nuclear
Isotipo: IgG1 DESMINA (D3) Presentación: Anti-Desmina es un anticuerpo monoclonal de ratón de sobrenadante diluido en una solución salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, de base proteínica y preservado con azida sódica.
Usos : El anticuerpo desmina detecta una proteína que es expresada por células de músculo liso, cardíaco y esquelético. Este anticuerpo es usado para demostrar los componentes miogénicos y/o la derivación de tumores miogénicos.
Control: Músculo esquelético
Visualización: Citoplasmática
Isotipo: IgG1/K E-CADHERINA (EP700Y) Presentación: Anti-E-cadherina es un anticuerpo monoclonal de conejo, diluído en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: E-cadherina es una proteína adhesiva que es expresada en células de línea epitelial. Este anticuerpo tiñe epitelio glandular asi como también adenocarcinomas de pulmón, tracto gastrointestinal y ovario. E-caderina es útil para distinguir adenocarcinomas de mesoteliomas y es positivo en algunos carcinomas de tiroides.
Control: Adenocarcinoma de pulmón, páncreas, mama
Visualización: Membranal
Isotipo: IgG CD3 Presentación: Anti-CD3 es una fracción de inmunoglobulina purificada de antisuero de conejo, diluída en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: El anticuerpo CD3 es considerado el mejor de todos los marcadores de células T.
Control: Ganglio linfático, amígadala
Visualización: Membranal GASTRINA Presentación: Anti-Gastrina es una fracción de inmunoglobulina purificada de antisuero de conejo, diluída en una solución salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: El anticuerpo Gastrina produce una tinción de células G de la mucosa antral/pilórica y de células productoras de gastrina o de un análogo estructural de la gastrina en el estómago.
Control: Estómago
Visualización: Citoplasmática ANTIQUIMIOTRIPSINA Presentación: Anti-A-1-Antiquimiotripsina es una fracción de inmunoglobulina purificada de antisuero de conejo, diluída en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: El anticuerpo primario Alfa-1-Antiquimiotripsina, reacciona con histiocitos y neoplasias histiocíticas.
Control: Apéndice, tumores histiocíticos, ganglio l infático, páncreas, glándulas salivales, amígadala
Visualización: Citoplasmática ACTH Presentación: Anti-ACTH es una fracción de inmunoglobulina purificada de antisuero de conejo, diluída en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: ACTH es un marcador útil en la clasificación de tumores de la pituitaria y en el estudio de enfermedades de la misma.
Control: Pituitaria normal
Visualización: Citoplasmática Alfa fetoproteína Presentación: Anti-Alfa-Fetoproteina es una fracción de inmunoglobulina purificada de antisuero de conejo, diluída en salina tamponada con Tris, pH 7,3-7,7, conteniendo proteína y preservado con azida de sodio.
Usos: La tinción positiva con este anticuerpo se ha observado en hepatocitos de hígado fetal y en hepatomas.
Control: Hígado fetal
Visualización: Citoplasmática THE END...
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